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Analyse biochimique et protéique du liquide folliculaire chez la chienne

proposé par Sylvie Chastant, Equipe Développement et Biotechnologies, UMR 1198 INRA/ENVA/CNRS, Ecole Nationale Vétérinaire d’Alfort, 7 avenue du Général de Gaulle, 94700 Maisons Alfort

Projet de stage :

Ces particularités contribuent probablement aux mauvais taux de maturation et fécondation in vitro obtenus chez la chienne : 10-30% des ovocytes canins atteignent in vitro le stade métaphase II vs 90% chez la vache (Luvoni et al., 2004). De plus, les milieux actuellement testés n’assurent pas même la survie des ovocytes canins, dont 20% dégénèrent au cours de la période de culture. Afin d’optimiser ces milieux de maturation in vitro, le préalable indispensable est de connaître l’environnement dans lequel mature l’ovocyte in vivo. Le liquide folliculaire préovulatoire sera analysé en 3 phases : analyse de toutes les protéines - dosage des stéroïdes (testostérone, androstènedione, œstradiol et progestérone) - analyse du système IGF (Insulin-like Growth Factor). Ce système joue un rôle important dans la régulation folliculogenèse chez plusieurs espèces mammifères (souris, jument, femme, brebis, truie …). Mais chez la chienne, le gène IGF1 détermine également la croissance staturale. Parallèlement, nos travaux mettent en évidence une différence du nombre de follicules ovulatoires selon la taille de la chienne. On peut donc s’interroger sur l’influence du système IGF (et ses variations) sur la folliculogenèse (et la régulation du nombre d’ovulations). L’objectif du travail est d’étudier la composition du liquide folliculaire (en parallèle de celle du sang) au cours de la phase préovulatoire et en fonction de la taille de la femelle.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :

  • Coloration et analyse cytologique
  • Electrophorèse bidimensionnelle couplée à la spectrométrie de masse
  • RIA
  • Analyse d’image (Image Quant)
  • Western-ligand blot (avec ou sans immunoneutralisation)

Documents joints

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