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Analyse de la dégradation de 4E-BP, l’inhibiteur de la traduction coiffe dépendante, en réponse à la fécondation chez l’oursin

proposé par Patrick CORMIER, UMR 7150 Mer & Santé UPMC/CNRS, Station Biologique Roscoff, BP 74, Place Georges Tessier, 29682 ROSCOFF Cedex

Projet de stage : Le développement embryonnaire précoce de l’oursin représente un paradigme pour l’analyse de la régulation de l’expression des gènes au niveau de la traduction. Parmi les acteurs que nous étudions, 4E-BP (eukaryotic Initiation Factor 4E-Binding Protein) est une petite protéine qui inhibe la traduction dépendante de la coiffe m7GTP et qui joue un rôle prépondérant dans la reprise de la synthèse protéique en réponse à la fécondation chez l’oursin. Nous avons démontré que la protéolyse de 4E-BP représente un nouveau moyen de contrôle de ce petit répresseur de la traduction dépendante de la coiffe m7GTP. La fécondation de l’ovule d’oursin offre l’opportunité d’identifier les mécanismes moléculaires impliqués dans la dégradation de 4E-BP.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Le stagiaire mettra au point des extraits acellulaires à partir d’œufs d’oursin prélevés quelques minutes après fécondation, période à laquelle 4E-BP est activement dégradé. La dégradation de 4E-BP sera analysée après addition, dans ces extraits acellulaires, de la protéine 4E-BP d’oursin fusionnée à la GST (disponibles au labo). Les niveaux de la protéine et de sa dégradation seront suivis par Western-blot en utilisant un anticorps dirigé contre la GST. Le rôle des sites de phosphorylation connus 4E-BP sera ensuite étudié dans le mécanisme de dégradation. Pour cela la dégradation de mutants non phosphorylables (sérine/thréonine mutées en alanine) ou constitutivement phosphorylés (sérine/thréonine mutées en aspartate ou glutamate) sera testées dans les extraits (les mutants sont disponibles au labo)

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