Analyse du phénotype des souris invalidées pour le gène Topaz

Projet de stage : Au laboratoire, il a été crée, par la technique d’hybridation suppressive soustractive, des banques d’ADNc d’ovaires fœtaux de moutons dans le but de mettre en évidence des gènes préférentiellement exprimés au cours du développement des gonades femelles (Baillet et al., 2008). Nous avons ainsi isolé plusieurs EST ne montrant aucune homologie avec des gènes connus. Certains présentent des homologies avec des ESTs humains ou murins et sont gonade-spécifiques. Parmi ces transcrits, nous avons découvert le gène Topaz, gène conservé au cours de l’évolution, spécifiquement exprimé dans les cellules germinales mâles et femelles et qui semble impliqué dans la gamétogenèse. Ce gène contient un domaine conservé qui serait impliqué dans la machinerie des petits ARN. La lignée de souris invalidées pour Topaz (par knock-in) a été crée, les animaux hétérozygotes pour la mutation sont en cours de reproduction. Le but de ce stage est donc d’analyser le phénotype de ces souris et plus particulièrement des gonades à différents stades de développement, la fertilité des animaux adultes sera également évaluée.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Biologie moléculaire : Extraction d’ADN (sexage des fœtus) et d’ARN de différents tissus, PCR et RT-PCR, PCR en temps réel. Histologie, immunohistochimie.