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Analyse du phénotype des souris invalidées pour le gène Topaz1

proposé par Béatrice MANDON-PEPIN, UMR Biologie du Développement et reproduction INRA de Jouy en Josas

Projet de stage : Au laboratoire, nous avons produit, par la technique d’hybridation suppressive soustractive, des banques d’ADNc d’ovaires fœtaux de moutons dans le but de mettre en évidence des gènes préférentiellement exprimés au cours du développement des gonades femelles [Baillet et al., 2008]. Nous avons ainsi pu mettre en évidence et caractériser un nouveau gène impliqué dans la gamétogenèse, le gène TOPAZ1 (Testis & Ovary-specific gene with a PAZ domain, gene 1). Ce gène est exprimé spécifiquement par les cellules germinales mâles et femelles et fortement conservé chez les vertébrés [Baillet et al., 2011]. L’invalidation du gène Topaz1 a été réalisée chez la souris par Knock-in. Si la fertilité des souris femelles invalidées pour le gène Topaz1 n’est pas perturbée, en revanche les souris mâles homozygotes pour la mutation sont stériles. Les testicules de ces souris montrent une absence de spermatozoïdes et de cellules haploïdes démontrant un rôle de Topaz1 dans la spermatogenèse et même au cours de la méiose. Nous avons déjà pu observer que la répression des rétrotransposons n’est pas perturbée et que l’appariement des chromosomes se fait correctement. Récemment, l’étude des profils d’ARN (microarray), issus de testicules normaux ou mutants, a mis en évidence un certain nombre de transcrits présentant une expression perturbée dans les testicules des souris invalidées pour le gène Topaz1. Nous souhaitons déterminer le stade précis d’arrêt de méiose des cellules germinales mâles et étudier les gènes dérégulés par Topaz1. Ce stage a donc pour but de définir précisément la fonction du gène Topaz1.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Biologie moléculaire : Extraction d’ADN (sexage des fœtus) et d’ARN de différents tissus, PCR et RT-PCR, PCR en temps réel. Histologie, immunohistochimie. Suivi de la lignée murine (croisement).

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