Analyse moléculaire des complexes d’initiation de la recombinaison méiotique

Projet de stage : Chez la levure S. cerevisiae, la recombinaison méiotique est initiée par des cassures double brin (CDB) de l’ADN , catalysées par la protéine Spo11. Une dizaine d’autres protéines sont nécessaires à la formation des CDBs. Pour identifier les complexes formés par ces protéines, nous avons réalisé une série d’expérience de purification par TAP tag utilisant comme appât les protéines Spo11, Rec114 et Mer2 et ainsi identifié de nouveaux partenaires potentiels. L’objectif du stage sera de vérifier ces interactions par co-immunoprécipitation et d’analyser les phénotypes méiotiques des mutants correspondants. Pour cela, construire par transformation les souches mutantes et étiquetées (fusion épitope Myc), les vérifier par PCR, analyser la progression du cycle méiotique (DAPI), la formation et la réparation des CDBs par Southern blot puis puces à ADN et la ségrégation des chromosomes.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Techniques de la génétique et de la biologie moléculaire et cellulaire.