Auto-régulation de l’AMH et de son récepteur spécifique par l’AMH dans les cellules de la granulosa

Projet de stage : : situation du sujet, objectif du stage, approches expérimentales

Nous travaillons sur l’hormone anti-Müllérienne (AMH), un membre de la famille du TGF-β sécrété par les cellules somatiques des gonades. L’AMH médie ses effets par l’intermédiaire de 2 types de récepteurs : un récepteur de type 2 qui lui est spécifique (AMHRII) et des récepteurs de type 1 qu’elle partage avec les BMPs. Chez la femelle, l’AMH a un rôle très important dans la folliculogenèse en réprimant le recrutement et la maturation folliculaire. Par contre il existe peu de données concernant sa régulation et celle de ses récepteurs au cours de la folliculogenèse. Dans le cadre de ce stage nous nous intéresserons à la régulation de l’AMH et de son récepteur AMHRII par l’AMH dans les cellules de la granulosa (CGs), qui sont à la fois les cellules productrices et les cellules cibles de l’AMH dans l’ovaire. Pour cela, nous utiliserons 2 modèles de cellules de la granulosa : la lignée murine At29 et des cultures primaires de granulosa de souris immatures. Nous analyserons l’effet de l’AMH sur l’expression de l’AMH et de l’AMHRII, au niveau messager et protéique. Nous étudierons également l’effet de l’AMH sur l’activité des promoteurs de l’AMH et de l’AMHRII après transfection de constructions rapporteur du promoteur de ces 2 gènes dans la lignée de CGs murines KK1.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :

 Culture primaire et de lignées de CGs
 extraction d’ARN totaux et de protéines
 PCR quantitative
 western blot
 transfection et essais luciférase.