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Bisphénol A et activation des récepteurs membranaires aux estrogènes de l’embryon préimplantatoire de mammifères.

proposé par Roger LEANDRI , Groupe de Recherche en Fertilité Humaine EA 3694 Université Paul Sabatier Toulouse III

Projet de stage : Nous avons récemment mis en évidence que certains consommables plastiques utilisés en routine en Assistance Médicale à la Procréation (AMP) exposent les ovocytes et embryons humains à du bisphénol A (BPA) à de faibles concentrations (4 à 5 fois inférieures à celles retrouvées dans le sérum ou le liquide folliculaire humain). En AMP, ce contact ne dure que quelques dizaines de secondes mais peut se répéter au cours des manipulations successives des embryons. Les effets d’un tel contact sont absolument inconnus. Dans le contexte de l’AMP, les ovocytes et embryons ne sont pas protégés par l’environnement maternel or il a été montré que la coculture d’embryons de souris sur tapis de cellules endométriales protégeait des effets délétères de fortes concentrations de BPA sur l’embryon murin par rapport à celui cultivé sans coculture. Le BPA est un xénoestrogène connu pour pouvoir exercer des effets dit non-génomiques rapides et puissants par contact avec les formes membranaires des récepteurs aux estrogènes. Parmi elles, le récepteur aux estrogènes couplé aux protéines G appelé GPER semble, compte tenu des données de la littérature, pouvoir être impliqué au niveau embryonnaire. Le but de ce projet est de mimer les conditions de laboratoire d’AMP pour exposer des embryons de souris à ce type de matériel et en analyser les conséquences sur le développement embryonnaire (cinétique de développement, taux de blastocystes et qualité des blastocystes, distribution cellulaire entre masse cellulaire interne et trophectoderme) et sur l’expression génique (analyse transcriptomique) et la méthylation de gènes clés. En parallèle, le travail cherche à démontrer formellement l’implication du BPA dans ces observations et à mettre en évidence l’implication de GPER via l’utilisation d’antagoniste spécifique de GPER. Ce travail expérimental chez l’animal se base donc sur une observation réalisée dans les pratiques de routines en AMP afin d’en évaluer la sécurité. Techniques mises en œuvre par le stagiaire : - Manipulations et culture embryonnaire chez la souris, - analyse de la répartition cellulaire entre trophectoderme et masse cellulaire interne au stade blastocyte par techniques d’histochimie après perméabilisation sélective du trophectoderme - analyse du niveau de méthylation de gènes cibles après bisulfitage/clonage/séquençage - participation à l’étude transcriptomique des blastocystes sur une plateforme toulousaine

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