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Caractérisation de la régulation épigénétique des chromosomes sexuels lors de la spermiogenèse.

proposé par Julie Cocquet, INSERM, Université Paris Descartes, Paris

Projet de stage : Le but du stage est de contribuer à la caractérisation du mécanisme épigénétique régulant l’expression des chromosomes sexuels au cours de la spermiogenèse. La responsable de stage a démontré le rôle clef de la protéine SLY dans ce processus. L’étudiant(e) M2 aura pour tâche i) d’identifier le mode d’action de SLY (interaction directe ou indirecte avec la chromatine ? partenaires protéiques ? gènes cibles ?) ; ii) de caractériser en détails les marques épigénétiques (variant histones, modifications post-traductionnelles, méthylation de l’ADN) associées à l’X et l’Y dans les spermatides de souris. L’étudiant(e) bénéficiera pour cela des modèles murins suivants : souris déficientes pour Sly, souris transgéniques exprimant la protéine SLY fusionnée à l’épitope FLAG (lignée transgénique Flag-Sly). Le/la stagiaire pourra également travailler sur le versant « humain » du projet : étude fonctionnelle des gènes de la famille Sycp3/Sly et caractérisation des marques épigénétiques de l’X et l’Y dans des spermatides issues de restes de biopsies testiculaires de patients.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Ce projet nécessitera l’utilisation de techniques régulièrement mises en œuvre dans l’équipe d’accueil : immuno-histo/cytochimie, immuno-précipitation de partenaires protéiques et de la chromatine, western blot, techniques d’étude de l’ADN méthylé (traitement au bisulfite suivi de PCR, pyroséquençage). Le projet impliqué également la manipulation de modèles murins (génotypage, croisement et dissection). Les expériences d’immunoprécipitation seront ainsi réalisées sur des extraits testiculaires de souris Flag-Sly en parallèle avec l’anticorps anti-SLY et l’anticorps anti-FLAG (anticorps connu pour donner de bons résultats par immunoprécipitation). Ces expériences ont pour but d’identifier de nouveaux partenaires protéiques de la protéine SLY. L’étudiant(e) M2 procédera également sur ce matériel à des expériences d’’immunoprécipitation de la chromatine avec pour objectif de discriminer les cibles directes des cibles indirectes de la protéine SLY.

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