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Caractérisation de la voie des MTOCs dans l’ovocyte des souris

proposé par Marie-Hélène Verlhac, Unité de Biologie du Développement, UMR7622, 9 quai Saint Bernard, Bat. C, 5e, 75005 Paris

Dans ce projet, nous nous intéressons à la mise en place des fuseaux méiotiques dans l’ovocyte de souris. La formation d’un fuseau méiotique est très particulière puisqu’elle met en jeu non pas deux centrosomes répartis de part et d’autre des chromosomes, mais plusieurs MTOCs répartis au hasard. Les mécanismes qui contrôlent la répartition et l’activation de ces MTOCs sont totalement inconnus. Or ces MTOCs jouent un rôle essentiel dans la formation des fuseaux méiotiques. En effet, nous avons montré récemment que dans l’ovocyte de souris le fuseau de méiose I peut se former et ségréger correctement les chromosomes homologues en absence de la voie Ran par un mécanisme de compensation passant probablement par les MTOCs (Dumont et al., 2006). Afin de mieux définir les étapes de formation du fuseau bipolaire (répartition et nombre des MTOCS autour des chromosomes avant et après rupture de la vésicule germinative) nous suivrons ces structures in vivo. Pour cela nous exprimerons une gamma-tubuline couplée à de la GFP. Nous pourrons ainsi tenter de répondre aux questions suivantes : à quel moment et avec quelles modalités les foci de gamma-tubuline sont-ils recrutés autour de la vésicule germinative ? est-ce avant et/ou durant la rupture de la vésicule germinative ? observe t’on des séparations et/ou une fusion des foci de g-tubuline (ou des MTOCs) ? Peut t-on estimer un nombre moyen de MTOCs nécessaire à la formation du fuseau ? Existe-t’il un échange entre MTOCs cytoplasmiques et MTOCs engagés dans le fuseau ? Comment une structure symétrique se forme-t’elle à partir de MTOCs de tailles différentes ou comment est régulée la nucléation/activation de ces MTOCs ?

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