Caractérisation des complexes protéiques d’initiation de la recombinaison méiotique

Projet de stage : Notre équipe a largement contribué à la caractérisation et la cartographie sur l’ensemble du génome des cassures double-brins initiatrices de la recombinaison généralisée entre les chromosomes homologues lors de la prophase de méiose chez la levure. L’activité catalytique responsable de la formation de ces coupures est portée par la protéine Spo11 (conservée chez les tous eucaryotes) mais au moins dix autres protéines sont nécéssaires à la formation de ces cassures, suggérant la formation de complexes protéiques encore mal caractérisés. De nouveaux partenaires de ces protéines viennent d’être identifiés au laboratoire. L’objectif du stage sera d’analyser ces nouvelles interactions (test double-hybride, co-immunoprécipitation) et de caractériser les phénotypes méiotiques de l’inactivation des gènes correspondants (effets sur la réplication, la formation des coupures et leur réparation, la ségrégation des chromosomes et la viabilité des produits de méiose).

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Les techniques utilisées sont celles de la génétique moléculaire (constructions in vitro et in vivo de souches mutantes, immunoprécipitation de la chromatine et des protéines) , de la biologie cellulaire (analyse de foci protéiques par immunofluorescence) et de la génomique en utilisant des puces à ADN.