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Caractérisation structurale et rôle régulateur de eEF2, facteur d’élongation de la traduction, dans le développement embryonnaire précoce

proposé par Odile MULNER-LORILLON, UMR MER &SANTE 7150 CNRS/UPMVC, Station Biologique, BP 74, 29682 Roscoff cedex

Projet de stage : Parmi les acteurs de la machinerie de la traduction, le facteur d’élongation eEF2 est décrit comme un régulateur potentiel de la synthèse protéique. La phosphorylation de eEF2 par sa kinase eEF2K empêche la fixation du facteur au ribosome et inhibe l’élongation. Nous avons récemment montré que la protéine est présente dans l’œuf non fécondé d’oursin sous deux isoformes de poids moléculaire proche, toutes deux phosphorylées. La fécondation induit des changements spécifiques de phosphorylation pour chacune des isoformes, changements corrélés à la reprise de l’activité synthétique du zygote et à l’entrée dans la première division mitotique. L’objectif du stage est d’identifier définitivement les isoformes caractérisées actuellement sur des critères de reconnaissance immunologique. Grâce à la connaissance du génome complet de l’oursin, un clonage du cDNA codant pour la protéine EF2 d’oursin est en cours au laboratoire. Une protéine recombinante produite en quantité va servir à générer des anticorps spécifiques. Il sera alors possible d’isoler chacune des isoformes par immunoprécipitation et de réaliser un séquençage des protéines par spectrométrie de masse (plate forme commune de la station biologique). Des études fonctionnelles seront entreprises par mesure d’activité après introduction de chacune des isoformes dans un lysat d’embryons capable de traduire in vitro des messagers reporters (lysats mis au point et pratiqués au laboratoire). Des mutations (technique en place au laboratoire) seront induites sur des sites potentiellement intéressants des deux protéines, principalement sur le site de phosphorylation, et les mutants produits seront étudiés dans les mêmes tests fonctionnels pour analyser le rôle régulateur de chaque protéine et de leur phosphorylation.

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