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Conséquences de l’induction de novo de centrioles lors de l’ovogenèse chez la souris

proposé par Marie-Hélène Verlhac, Collège de France / CNRS - Paris (75)

Projet de stage : Nous étudions le contrôle de l’assemblage et du positionnement des fuseaux méiotiques ovocytaires, évènements indispensables au succès des divisions méiotiques. Dans la plupart des espèces, les ovocytes perdent leurs centrioles, éléments clés des centrosomes, au cours de l’ovogenèse. Nous souhaitons étudier les conséquences de l’assemblage de novo de centrioles sur les divisions méiotiques. Les protéines impliquées dans la duplication centriolaire sont aussi capables d’induire la formation de centrioles de novo. C’est les cas notamment de Sas4/Plk4 (Polo Like Kinase 4). En collaboration avec l’’équipe de Renata Basto (Institut Curie, Paris), nous avons créé une lignée de souris transgénique permettant de sur-exprimer de manière conditionnelle la kinase PLk4 dans les ovocytes durant la phase de croissance folliculaire. Des expériences préliminaires sur cette lignée sont très encourageantes et suggèrent que cette sur-expression est délétaire pour le developpement ovocytaire. Le projet de M2 visera à une étude fine du phénotype des ovocytes issus de cette lignée. Pour cela nous testerons d”une part si Plk4 induit l’apparition de centrioles de novo. Par ailleurs nous analyserons les divisions méiotiques : assemblage des fuseaux méiotiques (par microscopie de type spinning disk in vivo et analyse sur oocytes fixés), positionnement de ces fuseaux, ploidie des divisions méiotiques (étalement chromosomique). Toutes ces expériences permettront de tester l’importance de la perte des centrioles, conservée au cours de l’évolution, sur l’ovogenèse murine.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Culture d’ovocytes de souris, micro-injection, imagerie de type Spinning Disk, biologie cellulaire et moléculaire.

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