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Contribution à l’étude de l’effet préventif de MgSO4 dans un modèle transgénique murin d’hémorragie intracranienne de l’extrême prématuré.

Stage proposé par Philippe LEROUX

« Chargé de Recherche à l’INSERM, ERI28, Faculté de Médecine et de Pharmacie, Université de Rouen »


Projet de stage : situation du sujet, objectif du stage, approches expérimentales

Les extrêmes prématurés présentent un risque d’hémorragies intra-craniennes, d’autant plus élevé que le terme à la naissance est précoce. Les sites de ces hémorragies sont essentiellement périventriculaires ce que l’on attribue à un état vasculaire cumulant les risques ; une angiogénèse soutenue, un faible soutien par les péricytes, une localisation en extrémité de réseau propice à des interruptions de flux sanguin lors de baisses de la pression artérielle notamment. Nous avons développé au laboratoire un modèle d’hémorragies chez le souriceau porteur de l’inactivation du gène de l’inhibiteur de l’activateur du plasminogène tissulaire (PAI-1-/-). Ces animaux montrent un risque hémorragique restreint à la période postnatale précoce. Nous avons montré une immaturité vasculaire chez la souris manifeste par la constitution de la matrice extracellulaire et un tonus protéolytique. Les néonatalogistes ont montré un effet neuroprotecteur de l’administration anténatale de MgSO4 chez la femme en menace d’accouchement prématuré avant 33 semaines de gestation. Le taux d’hémorragies intra-craniennes est diminué. Nous nous proposons de rechercher le mode d’action de MgSO4 dans le modèle murin, au niveau de l’activité protéolytique vasculaire pendant la période pré-hémorragique. Le stagiaire sera amené à participer à ces études par la pratique de tests in vivo chez le souriceau PAI-1-/-, à isoler des microvaisseaux et à réaliser des coupes histologiques pour pratiquer des mesures et des marquages d’activités protéolytiques, des immunomarquages et des mesures d’activités de transcription (RT-PCR). Les axes de recherche se dirigent vers les activateurs du plasminogène (t-PA et uPA), les métalloprotéinases de la matrice extracellulaire (MMP, ADAM…) et leurs substrats potentiels (Collagènes, Laminines, Intégrines, Protéines de jonctions et Aquaporines). Ce travail est mené actuellement par un doctorant (Mr Nicolas Dupré). Le détail du projet sera défini à l’arrivée du stagiaire en fonction de l’avancement des travaux à cette date.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Expérimentation animale Immuno-histochimie Zymographies (in situ, ex vivo) Western blot PCR

Publications du responsable de stage au cours des 5 dernières années  :

Henry VJ, Lecointre M, Laudenbach V, Ali C, Beresowsky V, Carmeliet P, Vivien D, Marret S, Gonzalez BJ, Leroux P. Increased glutamate stimulation evokes a paracrin signal from brain vascular endothelial cells : Identification of a dual effect of t-PA dependent of the developmental stage Neurobiol Dis ; 2013 ; 50:201-208 Leroux P, Marret S. PAI-1/t-PA ratio in cord blood : a potential index of brain hemorrhage risk in extreme preterms. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed 2013 ;98:3 F281-F282 Published Online First : 8 March 2013 doi:10.1136/archdischild-2012-303603

Roy V, Leroux P, Arabo A, Marret S,Gonzalez B Modèles animaux de la prématurité : mesures comportementales des effets des lésions cérébrales. Enfance 2013(01):77-94.

Omouendze PL, Henry VJ, Porte B, Dupré N, Carmeliet P, Gonzalez BJ, Marret S , Leroux P. Hypoxia-ischemia or excitotoxin-induced tissue plasminogen activator-dependent gelatinase activation in mice neonate brain microvessels PLos-ONE, 8(8) :e71263.

Lecointre M, Hauchecorne M, Chaussivert A, Marret S, Leroux P, Jegou S, Leroux-Nicollet I, Gonzalez BJ, Henry VJ. The efficiency of glutamate uptake differs between neonatal and adult cortical microvascular endothelial cells. J Cereb Blood Flow Metab. 2014. 34:764-767.

Leroux P, Omouendze P, Roy V, Dourmap N, Carmeliet P, Brasse-Lagnel C, Gonzalez BJ, Leroux-Nicollet I, Marret S. Age-dependent neonatal intracerebral hemorrhage in plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) knock-out mice. J Neuropathol Exp Neurol 2014, 73:387-402.

Porte B, Hardouin J, Zerdoumi Y, Derambure C, Hauchecorne M, Dupré N, Obry A, Lequerré T, Gonzalez B, Bekri S, Flaman JM, Marret S, Cosette P, Leroux P. Major protein remodeling in brain microvessels during neonatal period in the mouse : a proteomic and transcriptomic study (soumis J Cereb Bl Flow Metab)

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