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Contrôle de la méiose I

proposé par Alex McDOUGALL, Biologie du Développement, UMR 7009 CNRS / Université Pierre et Marie Curie, Observatoire Océanologique, 06 234 Villefranche sur Mer Cedex

Projet de stage : Les erreurs de ségrégation des chromosomes homologues au cours de la transition métaphase I - anaphase I constituent la cause majeure de fausses couches chez la femme ou si le fœtus survie trisomie – les syndromes de Down’s, Edward’s et Patau’s. Des que les femmes approchent la ménopause environ 30% des ovocytes sont aneuploïdes. Par rapport aux difficultés d’étudier les ovocytes humains les scientifiques utilisent les models pour étudier le processus de ségrégation chromosomique pour mieux comprendre le mécanisme qui contrôle la séparation des chromosomes méiotiques. Notre but est de mieux comprendre les mécanismes d’entrée en anaphase chez les chordés en utilisant différentes techniques, dont analyse des protéines identifiées par un criblage « yeast two hybrid » impliquées dans la méiose par des tests d’interaction in vitro par « pull down » suivi d’une analyse fonctionnelle dans les ovocytes d’ascidie. Une étude des protéines impliquées dans la séparation des chromosomes sera initiée avec une étude dynamique de l’imagerie de protéines de fusion avec EGFP, Venus et Rfp1/mCherry. Selon les résultats, nous prendrons une approche de sur expression (dominant négative/positive) ou « knockdown » suivi par une analyse des chromosomes par la technique de « chromosome spread » pour déterminer le niveau et type de aneuploidie.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Biologie moléculaire – fabrication des outils moléculaires (protéines de fusion genre GFP /venus), physiologie cellulaire – microinjection, imagerie confocale et « widefield » des protéines de fusion (GFP), biologie cellulaire - immunomarquage, biochimie – « pull down » et embryologie - culture des embryons et in vitro fecondation.

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