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Différenciation des cellules souches de l’embryon : régulation de l’expression de Gata6 pendant la préimplantation

proposé par Claire Chazaud, CNRS, INSERM - Clermont-Ferrand (63)

Projet de stage : Au troisième jour de développement, l’embryon de souris est constitué de trois types cellulaires distincts : les cellules souches du trophectoderme, de l’épiblaste et de l’endoderme primitif (EPr). Notre équipe analyse les mécanismes moléculaires de la différenciation des cellules en épiblaste ou en EPr. Nous avons montré que cette différenciation dépend des interactions antagonistes de deux facteurs de transcription, Nanog et Gata6 ainsi que de la voie de signalisation Fgf. En effet, sans Nanog ou sous l’action du Fgf, toutes les cellules deviennent de l’EPr et à l’inverse sans Gata6 ou en inhibant le Fgf toutes les cellules deviennent de l’épiblaste. Le projet de Master2 est d’analyser le contrôle de l’expression de Gata6 à ces stades de développement. L’étudiant(e) analysera les régions régulatrices "en cis" du gène Gata6 par immunoprécipitaion de chromatine (ChIP) et par transgenèse grâce à des gènes rapporteurs fluorescents. La transgenèse sera effectuée à la fois dans des modèles de cellules souches in vitro (ES, Xen, F9) et aussi dans l’embryon, grâce à des cultures ex vivo. L’expression des transgènes sera comparée à des marqueurs moléculaires par immunofluorescence et/ou hybridation d’ARN in situ.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : culture cellulaire, culture d’embryons, transgenèse, ChIP, analyse expression de gènes (RTqPCR, hybridation in situ, western, immunofluorescence), microscopie confocale, clonage.

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