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Effet de l’expression de la protéine Doppel dans les cellules de Sertoli sur la fertilité mâle chez la souris.

proposé par Pierre CALVEL Katayoun Moazami-Goudarzi, Laboratoire Génétique Animale et Biologie Intégrative – INRA- 78350 Jouy-en-Josas

Projet de stage :

La maîtrise de la reproduction chez les mammifères d’élevage constitue un champ de recherche en pleine expansion, impliquant des enjeux économiques et sociétaux importants. Dans ce contexte, le gène Prnd, codant pour la protéine Doppel, a été identifié comme un acteur majeur de la fertilité mâle chez de nombreuses espèces. Il est fortement exprimé dans le testicule et nos récents travaux suggèrent une expression importante de ce gène dans les cellules germinales mâles et dans les cellules de Sertoli chez la souris adulte. Par ailleurs, l’invalidation de ce gène conduit à une stérilité associée à un défaut tardif de spermatogénèse, sans pour autant que les causes de ce phénotype ne soit élucidées (récente revue de Allais-Bonnet et Pailhoux, 2014). Nous nous proposons d’étudier le phénotype de stérilité murine associé à l’invalidation complète du gène Prnd chez la souris en recherchant l’origine cellulaire du phénotype de stérilité observé chez ces animaux. Dans un premier temps, nous avons réalisé une lignée de souris contenant une construction AMH-Prnd introduite par transgénèse additive dans des souris FVB/N Prnd invalidées. Ce modèle de sauvetage fonctionnel, qui nous a montré qu’une ré-expression de Doppel limitée aux seules cellules de Sertoli permet une récupération partielle de la fertilité des souris mutantes, fera l’objet d’une étude complète lors de ce stage. Dans un second temps, cette stratégie sera reproduite pour permettre une réexpression ciblée de Doppel dans les cellules germinales mâles, en plaçant le promoteur du gène VASA en amont du gène Prnd. L’introduction de cette construction VASA-Prnd par transgénèse additive dans les souris mâles FVB/N Prnd invalidées permettra d’évaluer si l’expression de Doppel dans les cellules germinales est également requise pour la production d’un sperme fertile. Enfin, une recherche de promoteurs testicule-spécifique en amont de Doppel et de leurs facteurs de transcription associés sera entreprise.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Clonage, génotypage, dissection de l’appareil urogénital de souris, analyse histologique d’échantillons biologiques, Immunofluorescence, Hybridation in Situ, PCRq, microscopie électronique, recherche de promoteurs transcriptionnels.

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