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Effet, efficacité et tolérance du Sildenafil pour prévenir des lésions périnatales : une étude pré-clinique.

proposé par Christiane Charriaut-Marlangue, INSERM, Paris.

Projet de stage : Nous avons récemment montré que le monoxyde d’azote (NO) endogène modulait le flux sanguin collatéral dans un modèle d’ischémie-reperfusion chez le rat nouveau-né (Bonnin et al., 2012). L’inhalation de NO (iNO) a été trouvée neuroprotectrice dans des modèles d’ischémie cérébrale adulte, et dans notre modèle d’ischémie néonatale mais seulement s’il est donné au cours de l’ischémie, et non quand il est donné tardivement après la reperfusion (Charriaut-Marlangue et al., Stroke 2012). Notre objectif est d’étudier la validité du sildénafil administré immédiatement à la reperfusion dans deux modèles de lésions cérébrales périnatales. Le sildénafil est un inhibiteur très spécifique de la phosphodiesterase 5 qui agit en évitant la dégradation du NO. Les deux modèles, chez le raton P7, sont l’hypoxie-ischémie (HI) et l’ischémie-reperfusion (IR).

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
- Les modèles animaux seront faits par un chercheur expérimenté.
- Test d’une gamme de concentration du sildénafil.
- Sacrifice des animaux, préparation des cerveaux (enrobage paraffine), coupe au microtome, mesure les lésions après coloration au crésyl-violet, calcul des volumes de lésion.
- Sur d’autres animaux, prélévements de tissus, préparations des extraits protéiques
- Immunohistochimie sur coupes paraffine (test des NO synthases).
- Electrophorèse et Western pour étudier la phosphorylation de la NOS endothéliale et de la NOS neuronale
- L’activité de la PKG (cGMP/NO/PKG-dépendant) sera mesurée avec le kit CycLex (Clinisciences).

Documents joints

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