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Effets des cynurénines sur la physiologie de l’épididyme et sur les fonctions spermatiques.

proposé par Joel DREVET, Laboratoire GReD, UMR CNRS6247, INSERM U931, Clermont Université, 24 avenue des Landais 63171 Aubière cedex

Projet de stage : Nous avons récemment montré que l’épididyme des mammifères produisait une quantité importante de dérivés du catabolisme du tryptophane regroupés sous le terme de cynurénines. Dans d’autres tissus et d’autres situations physiologiques, ces cynurénines sont connues pour leurs effets sur le contrôle de l’inflammation, de la balance apoptose/prolifération, de la balance redox et enfin de la signalisation calcique. Le projet proposé vise à analyser pour les cynurénines identifiées dans l’épididyme murin plusieurs aspects tels que : -leurs localisations (cellulaire ou luminale) dans l’épididyme murin par immunohistochimie et chromatographie HPLC, -les effets que ces différentes kynurénines peuvent avoir in vitro sur les spermatozoïdes et sur des cellules épididymaires en culture (évaluations : de l’apoptose induite, de la fragmentation de l’ADN spermatique, de la mobilité spermatique, de la capacité à réaliser la réaction acrosomique, de la production de dérivés actifs de l’oxygène, du potentiel de membrane mitochondrial….) à l’aide de sondes fluorescentes appropriées et de la cytométrie en flux. Une comparaison sera faite entre spermatozoïdes recueillis dans la queue de l’épididyme de souris sauvages et de souris invalidées pour l’enzyme limitante qui conduit à la production de ces cynurénines, l’indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO1) disponibles au laboratoire.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Immunohistochimie, immunocytochimie + cytométrie en flux, CASA, cultures cellulaires, TUNEL assays, microsopie photonique.

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