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« Effets des expositions à un mélange de nanocérium et de benzo-[a]-pyrène sur la barrière placentaire humaine »

proposé par Ioana FERECATU , UMR-S 1139 INSERM/Université Paris Descartes " Physiopathologie et Pharmacotoxicologie Placentaire Humaine, Microbiote pré et post-natal (3PHM)" Faculté de Pharmacie de Paris 75006 Paris, France

Projet de stage : Les polluants environnementaux tels que les Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP) et les nanoparticules (NP) issues des technologies émergentes, se retrouvent dans la pollution atmosphérique et représentent un risque majeur d’exposition pour la femme enceinte, pouvant affecter l’évolution de la grossesse. Parmi les HAP, le benzo-a-pyrène (BaP) est actuellement classé cancérigène, mutagène et reprotoxique pour l’homme, mais il est aussi un perturbateur endocrinien. La principale cible cellulaire du B(a)P est le récepteur des hydrocarbures aromatiques (AhR), un facteur de transcription dont l’activation conduit à l’expression de gènes impliqués dans le métabolisme des xénobiotiques, mais dans le cas de BaP conduisent aussi à sa bioactivation en métabolites toxiques. Les NP de CeO2 sont utilisées pour ses propriétés catalytiques, par exemple sont systématiquement rajoutés dans le Diesel, et de ce fait se retrouvent dans la pollution ambiante. Les NP, à l’échelle nanométrique, possèdent des propriétés physico-chimiques particulières et sont capables de traverser des barrières épithéliales et d’atteindre la circulation maternelle. Les NP ont notamment la capacité d’adsorber des molécules, tels que le BaP, formant une corona qui pourrait favoriser l’entrée de ces molécules dans l’organisme par leurs propriétés lipophiles. Souvent issues des mêmes sources de pollution (Diesel, cigarettes…), le risque sanitaire de la co-exposition de NP avec des HAP (tels que BaP) au niveau de la barrière placentaire n’a pas encore été évalué ; leurs effets en mélange pourraient être exacerbés ou diminués par rapport aux expositions individuelles. Ce projet vise à évaluer les effets des expositions en mélange des NP de CeO2 enrobés avec du BaP (stablement) en comparaison à l’exposition aux NP de CeO2 ou BaP individuelles, sur des modèles placentaires humains. L’exposition à ces polluants sera réalisée sur des cytotrophoblastes humaines primaires purifiés et qui se différencient spontanément en syncytiotrophoblastes. Les conséquences de ce mélange des polluants en termes de toxicité, de différentiation et fonction trophoblastique, ainsi que la détoxification cellulaire seront évaluées et comparées aux effets des expositions individuelles. L’activité et le rôle d’AhR, en tant qu’intervenant majeur dans le métabolisme des polluants et la différenciation cellulaire, seront également évalués lors de ce stage. Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
- purification et culture primaires de trophoblastes humains
- transfections de plasmides ADN (construction XRE-sLUC et XRE-GFP)
- imagerie cellulaire (MET, confocale), immunocytochimie
- biochimie : dosages hormonaux, Western Blot, RT-qPCR
- cytotoxicité : test WST-1, sonde DFC

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