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Etude de gènes clés dans la détermination du sexe normale et pathologique chez l’homme.

proposé par Caroline EOZENOU, Unité de Génétique du Développement Humain, Institut Pasteur, 25, rue du Dr Roux, 75724, PARIS Cedex

Projet de stage : Les analyses génétiques de cas de Désordres du Développement Sexuel (DSD) avec dysgénésie gonadique, réalisées au laboratoire par séquençage d’exome, ont permis d’identifier plusieurs mutations ponctuelles dans des gènes, notamment déjà connus pour leur rôle dans le déterminisme sexuel de la gonade chez l’homme. Cependant, le phénotype associé à ses mutations reste largement inexpliqué. Le présent projet vise à modéliser la mutation apparue chez un patient 46, XX présentant une inversion sexuelle permettant ainsi de mieux préciser le rôle de ce gène au cours du déterminisme sexuel normal ou pathologique en combinant diverses approches cellulaires et moléculaires : (i) Clonage des gènes et reproduction des mutations par mutagenèse dirigée ; (ii) étude de leurs effets sur la structure et la fonction des protéines correspondantes, sur leur localisation subcellulaire et sur leur interaction avec divers facteurs importants pour le développement testiculaire ou ovarien (Gel retard, test luciférase, co-immunoprécipitation – pour exemple, lire : Lourenço et al, PNAS, 2011) (iii) Analyse fonctionnelle par culture organotypique de gonades fœtales de souris, évaluation de l’effet de l’inhibition de l’expression, de l’activité ou de la voie de signalisation des protéines concernées sur le développement gonadique (utilisation d’une lignée de souris transgénique exprimant la protéine fluorescente GFP dans les ovaires et testicules fœtaux, permettant le tri par FACS des cellules supportrices)

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : PCR, clonage bactérien, test d’activité de la Luciferase, Co-immunoprécipitation, PCR quantitative, immunohistochimie, manipulation de souris transgéniques, dissection d’embryons et de gonades fœtales de souris, culture de gonades fœtales, FACS.

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