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 : Etude de l’interaction entre deux voies de signalisation CK2 et RAGE au sein des membranes fœtales humaines

proposé par Loïc Blanchon, : GReD - Laboratoire de Biochimie Médicale Faculté de Médecine - 28, Place Henri Dunant - BP.3 63000 Clermont-Ferrand

Projet de stage : situation du sujet, objectif du stage, approches expérimentales :

La rupture des membranes fœtales (poche des eaux), physiologique ou pathologique, reste au jour d’aujourd’hui un phénomène encore mal compris. Ce dernier est toutefois systématiquement caractérisé par une désorganisation tissulaire et cellulaire conduisant à une plus grande fragilité. En intégrant des signaux d’alarmes variés (alarmines), à terme ou prématurément (dans les cas pathologiques) et en s’appuyant sur les résultats préliminaires de l’équipe, le récepteur RAGE (Receptor of Advanced Glycation End products) et sa phosphorylation par la caséine kinase 2 (CK2) semblent être essentiels à ce phénomène. Notre projet vise à étudier la phosphorylation de RAGE par cette kinase et d’en caractériser les conséquences sur les phénomènes d’inflammation, de dégradation de la matrice extracellulaire, de prolifération et de mort cellulaire médiés par ce récepteur. L’objectif du stage sera d’étudier cette voie de signalisation au sein des MF et consistera à :
- finaliser le travail de caractérisation de l’expression, de la co-localisation et de l’interaction physique de CK2 et RAGE au sein des membranes fœtales et des lignées (modèles) cellulaires qui en dérivent.
- étudier l’influence des ligands de RAGE (HMGB1, AGE…) et/ou de l’extinction de RAGE (siRNA, CRISPR-Cas9) sur l’expression de CK2 et sur l’activation des voies de signalisation intracellulaire.
- caractériser les sites de phosphorylation de RAGE par CK2 et étudier l’influence de cette modification post-traductionnelle sur les phénomènes cellulaires régulés par ce récepteur et ce en lien avec la fragilisation des membranes fœtales.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Culture cellules primaires et de lignées / Surexpression et extinxtion (siRNA) RAGE / Culture d’explants / qPCR / Western-blot / transfection et gène rapporteur / immunofluoresence / Dosage Elisa.

Documents joints

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