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Etude de l’impact métabolique et endocrinien du diethyl-hexyl phtalate (DEHP) et du mono (2-ethylhexyl) phtalate (MEHP) sur la stéroidogenèse humaine.

proposé par Bernard Jégou, GERHM-INSERM U.625 - Université de Rennes I, Campus de Beaulieu, 35042 Rennes cedex

Projet de stage : Le but global de cette étude est d’apprécier dans quelle mesure les données établies chez le rat sont transposables chez l’homme, à savoir que les phthalates bloquent la C 17-20 lyase, induisant ainsi une diminution de la testostérone, probablement responsable des différentes anomalies du syndrome de dysgénésie testiculaire. Ce travail aura pour but de mettre en évidence :
- sur les explants testiculaires humain adulte : une diminution du taux de testostérone en présence de phthalates. Nous chercherons à déterminer la concentration délétère de phthalates et quels autres androgènes dont la production peut être altérée par les phthalates ;
- sur les microsomes de testicule humain adulte on cherchera à mettre en évidence si l’effet des phthalates sur la stéroïdogenèse peut être localisé au niveau enzymatique ;
- sur la lignée NCI-H295 humaine : on recherche la diminution du taux de testostérone puis le niveau du blocage en mesurant les précurseurs de la testostérone ;
- sur la lignée KGN, après la mise au point des conditions de culture : on cherchera à mettre en évidence une diminution du taux de testostérone dans les cellule de la lignée KGN après exposition aux DEHP et MEHP, puis à rechercher à quel niveau s’effectue le blocage de la stéroidogénèse, par un dosage des précurseurs.
- sur les 2 lignées sus-citées, des études mécanistiques seront entreprises en utilisant une approche transcriptomique à l’aide de puces pangénomiques Agilent. En définitive, ces travaux permettront de mieux identifier le risque de ces pertubateurs endocriniens sur la fonction de reproduction masculine.

Techniques mises en oeuvre par le stagiaire : L’étudiante aura en charge de mettre au point l’étude des lignées KGN, leur condition de mise en culture et les tests visant à mettre en évidence l’effet du MEHP et du DEHP. Elle procédera également à l’étude du métabolisme du DEHP dans les cellules de la lignée KGN. Des dosages ELISA de stéroïdes, des PCR quantitatives seront réalisés et l’étudiante devrait participer aux approches transcriptomiques.

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