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Etude de l’impact épigénétique de la fécondation et culture in vitro chez la souris en utilisant le modèle de l’inactivation du chromosome X

proposé par Catherine Patrat, Laboratoire d’Histologie – Embryologie – Biologie de la Reproduction, Hôpital COCHIN, 123 bd de Port Royal, 75014 PARIS

Projet de stage : L’inactivation du chromosome X, du fait de sa régulation épigénétique, constitue un excellent modèle d’étude des anomalies éventuelles de la mise en place du programme d’expression génique qui pourraient survenir au cours du développement d’embryons obtenus par FIV. L’objectif principal du projet est d’étudier l’effet potentiel de la superovulation et la culture in vitro des gamètes et des embryons sur la mise en place de l’inactivation du chromosome X au cours du développement pré-implantatoire chez la souris. Les cinétiques d’expression du gène Xist et de différents gènes situés sur le chromosome X seront étudiées par RNA-FISH. Les modifications des histones à type d’hypoacétylation ou d’hyperméthylation, et du recrutement des protéines du groupe polycomb sur le chromosome X paternel seront analysées par immunofluorescence. Ces techniques, seules ou combinées, seront réalisées sur embryon unique à tous les stades du développement pré-implantatoire (2, 4, 8 cellules, morula et blastocyste) et comparées à celles observées chez les embryons conçus in vivo sans super ovulation (groupe contrôle). En autorisant une analyse directe sur un seul embryon, elles permettront de s’affranchir de la variabilité inter embryonnaire et du mosaïsme cellulaire et d’évaluer précisément les stades éventuellement critiques de la FIV, en ciblant sur la fécondation et l’activation du génome embryonnaire.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Fécondation in vitro chez la souris RNA FISH et/ou immunofluorescence et/ou DNA FISH sur embryons de souris

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