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Etude de l’intégrité de la structure chromatinienne au cours de la réparation de cassure double chaine dans le contexte naturel de la recombinaison méiotique chez S. cerevisiae.

proposé par Emmanuelle MARTINI, Laboratoire de réparation de l’ADN, UMR217, CEA, 18 route du Panorama, 92260 Fontenay aux Roses

Projet de stage :

Afin de préserver l’intégrité de l’information génétique et épigénétique, il faut, au cours de la réparation de lésions de l’ADN, préserver non seulement l’information portée par la molécule d’ADN, mais également par la structure chromatinienne dans laquelle elle se trouve. Le premier niveau d’organisation de la chromatine est le nucléosome composé d’un fragment d’ADN entouré autour d’un octamer d’histones. Le génome est naturellement remanié au cours de la production des gamètes grâce à la formation et la réparation programmée de cassures doubles brins. Notre projet à pour but de suivre et d’identifier les modifications spécifiques des histones au cours de la méiose. Cette étude sera menée dans un premier grâce aux techniques de chromatine immunoprécipitation (CHIP) et western blot. L’organisme model utilisé est la levure S.cerevisiae. Cet organisme unicellulaire a largement permis d’identifier et de comprendre les étapes moléculaires essentielles à la division méiotique chez les eucaryotes supérieurs.

Ce projet sera mené en collaboration avec Valerie Borde de l’UMR 218 à l’institut Curie Paris

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Techniques de clonage afin de construire des outils génétiques tels que délétions de gènes, génération de proteines taggées. Chromatine immunoprécipitation sur protéines taggées et PCR quantitative. Western blot. Southern blot pour suivre la formation des cassures doubles brins au cours de la méiose dans les différents contextes mutants.

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