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Etude de la régulation du récepteur RAGE par la protéine kinase CK2 (caséine Kinase 2) au sein des membranes fœtales

proposé par Vincent SAPIN, GReD - Laboratoire de Biochimie Médicale Faculté de Médecine - 63000 Clermont-Ferrand

Projet de stage : Le but de ce travail de recherche consistera tout d’abord à étudier le niveau d’expression et la localisation des sous-unités (α, α’ et β) de la caséine kinase 2 (CK2) au sein d’échantillons de membranes fœtales (MF) provenant de grossesses menées à terme et de grossesse où les MF ont rompu prématurément. Cette première partie du travail sera aussi réalisée au sein des différents types de cellules primaires et des lignées constituant les MF (disponibles au laboratoire). Par la suite, ce projet visera à démontrer que CK2 et RAGE interagissent physiquement et fonctionnellement au sein des membranes fœtales. Enfin, l’étude de la phosphorylation de RAGE par cette sérine/thréonine kinase sera menée dans le but de préciser les sérines impliquées et de comprendre l’influence de cette modification post-traductionnelle sur la capacité de ce récepteur à induire un signal intracellulaire. Ce travail, pouvant être décrit comme plus fondamental vise à terme au développement d’une stratégie pharmacologique (peptide bloquant de RAGE ou injection du récepteurs soluble sRAGE), immunologique (anticorps anti-RAGE) ou moléculaire (siRNA ou shRNA dirigé contre RAGE) qui sera testée sur le modèle murin (souris wild type et/ou RAGE -/-) afin de préciser l’importance du couple CK2/RAGE dans la rupture des membranes physiologique et pathologique.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Culture cellules primaires / lignées / Culture explants / RT-qPCR / Western-blot / Transfection et gène rapporteur / Immunofluorescence / Dosage ELISA

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