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 : Etude des interactions entre cellules souches fœtales dérivées de sang de cordon et différentes lignées de cellules de cancer du sein

proposé par Nathalie CHABBERT-BUFFET, Centre De Recherche Saint-Antoine(CRSA), INSERM UMRS_ 938

Projet de stage : L’objectif de ce projet est d’évaluer les interactions entre cellules souches fœtales dérivées de sang de cordon et différentes lignées de cellules de cancer du sein. Le sang de cordon frais sera collecté dans le service de Gynécologie Obstétrique et Médecine de la Reproduction de l’Hôpital Tenon (centre obstétrical accueillant 2600 accouchements par an), au moment d’un accouchement physiologique faisant suite à un travail spontané, ponctuant une grossesse de déroulement normal, chez 5 femmes sans antécédent médical notable. Le prélèvement sera réalisé avant le décollement placentaire dans 2 tubes EDTA de 10mL, et transféré au laboratoire dans les 4 heures suivant l’accouchement. Le sang sera soumis à préparation pour isoler les cellules souches fœtales selon la méthode décrite par Kovilakath et al. Une fraction similaire de cellules souches isolées sera mise en culture avec différentes lignées cellulaires de cancer du sein (cultures déjà mises au point au laboratoire). Les groupes contrôles seront constitués par la culture des lignées cellulaires cancéreuses sans exposition aux cellules souches fœtales. Après culture, les ARN (ARN) totaux des cellules cancéreuses seront extraits et le transcriptome analysé en collaboration avec la Plateforme Génomique de l’Institut Cochin. Les transcriptomes des cellules cancéreuses ayant été exposées aux cellules souches seront comparés à ceux des cellules cancéreuses sans exposition. Le rôle potentiel dans la cancérogenèse des gènes correspondant à ces ARNm ainsi identifiés sera finalement évalué à l’aide du logiciel Ingenuity Pathway Analysis (IPA : http://www.ingenuity.com). Les résultats seront confirmés par RT-PCR pour des ANRm d’intêret.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
  Isolation des cellules souches fœtales du sang de cordon
  Culture cellulaire des lignées cellulaires de cancer du sein
  Extraction des ARN totaux
  Utilisation du logiciel Ingenuity Pathway Analysis (IPA : http://www.ingenuity.com) pour l’identification des ARNm d’intérêt
  RT-PCR pour confirmation des résultats
  Analyse statistique des données

Documents joints

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