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Etude des interactions entre les acteurs de la méthylation (DNMTs) et de la démethylation de l’ADN (TET et GADD45) au sein des membranes foetales humaines

proposé parDr. Loic BLANCHON ,EA Université Clermont-Ferrand

Projet de stage : Etude des interactions entre les acteurs de la méthylation (DNMTs) et de la démethylation de l’ADN (TET et GADD45) au sein des membranes foetales humaines La thématique de recherche de l’équipe EA 7281 R2D2, s’est depuis de nombreuses années focalisée sur l’étude des membranes foetales humaines. Transitoires, mais indispensables, elles ont pour fonctions principales de protéger et d’assurer le développement harmonieux du foetus. Pour ce faire, leur intégrité tout au long de la grossesse est essentielle afin d’éviter une naissance avant terme pouvant avoir de graves conséquences sur le nouveau-né. Parmi les phénomènes cellulaires contrôlant et régulant la résistance et l’élasticité membranaires durant 9 mois, l’empreinte épigénétique et particulièrement la méthylation de l’ADN apparaissent essentielles. Peu étudiée au sein de ces membranes, il a par contre été d’ores et déjà démontré qu’il existe un lien fort entre dérégulation de la méthylation de l’ADN au niveau placentaire, modifications de l’expression des gènes et pathologies obstétricales (pré-éclampsie ou retard de croissance intra-utérin, par exemple). Avec comme but général de mieux comprendre les relations entre la méthylation de l’ADN et la rupture à terme et/ou prématurée des membranes foetales, ce stage de M2 (réalisé en collaboration avec l’équipe du Dr. Daniel Vaiman implantée à l’institut Cochin à Paris / INSERM U1016) a pour objectifs :
- de caractériser les niveaux d’expression de l’ensemble des acteurs de l’équilibre méthylation/démethylation (DNMT, TET et GADD45) (ARNm et protéines),
- d’étudier les corrélations d’expression et les interactions possibles entre chacun des membres afin de mettre en évidence un potentiel lien fonctionnel entre ces différents acteurs,
- de confirmer ces corrélations grâce à des expériences de siRNA sur des cultures de cellules amniotiques et chorioniques ainsi que sur des lignées cellulaires couramment utilisées et maitrisées dans l’équipe. Techniques mises en oeuvre par le stagiaire : Bio-informatique / Analyse méthylome / qPCR / vecteurs d’expression taggés / co-immunoprécipitation / siRNA / culture de cellules (primaires et lignées) / western-blot.

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