Etude des protéines impliquées dans la fusion cellulaire lors de la différenciation trophoblastique

Projet de stage : Nous avons identifié deux facteurs directement impliqués dans la fusion cellulaire : la syncytine-1 (protéine d’enveloppe du rétrovirus HERV-W) (Frendo et al, Mol Cell Biol, 2003) et la connexine 43 (protéine des jonctions communicantes) (Frendo et al, J Cell Sci, 2003). Une autre protéine d’enveloppe rétrovirale (FRD), d’expression spéficiquement trophoblastique, est potentiellement intéressante puisque nous venons de montrer qu’elle a une localisation et une expression différente dans les trophoblastes trisomiques (qui fusionnent peu et avec retard) (Malassiné et al, Retrovirology, 2008). Enfin, la protéine Zona Occludens-1 (ZO-1 : protéine constitutive des jonctions serrées et adhérentes) qui interagit avec la connexine 43 semble jouer un rôle dans la fusion cellulaire. Lorsque l’on inhibe l’expression de la ZO-1 par des siRNA, on observe une diminution de l’expression de la connexine 43 suivie d’une diminution de la fusion trophoblastique (Pidoux et al, soumis pour publication). L’objectif du stage est de montrer (en utilisant la technique de GST-pull down et des protéines recombinates) que ces protéines agissent sous la forme d’un complexe protéique fusogène et d’identifier les autres protéines constitutives de ce complexe.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : • Biologie cellulaire : Culture primaire de cytotrophoblastes normaux et trisomiques ; immunohisto et immunocytofluorescence. • Biologie moléculaire : PCR ; clonage, séquençage ; mutagénèse dirigée ; siRNA. • Biochime : Extraction et purification de protéines recombinantes ; GST-pull down.