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Etude des sécrétions de protéases par des cellules endothéliales microvasculaires cérébrales en culture en fonction de la maturité cellulaire.

proposé par Dr. Philippe LEROUX , Equipe INSERM-Région Haute-Normandie ERI28 Faculté de Médecine et de Pharmacie Université de Rouen 76183 Rouen

Projet de stage :

Sujet : Sécrétions de protéases par les cellules endothéliales microvasculaires cérébrales murines en primoculture, en réponse à des facteurs délétères potentiellement impliqués dans les hémorragies intraparenchymateuses/ intraventriculaires du prématurissime : Etude en fonction de la maturité cellulaire endothéliale. Objectif : Le travail proposé vise à caractériser les différences ontogéniques d’expression et de sécrétion protéasique endothéliale vasculaire cérébrale en conditions basale ou toxique, en rapport avec une vulnérabilité néonatale spécifique.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :

Culture cellulaire primaire (endotheliales et astrocytes). Les travaux seront menés chez la souris ; en primoculture de cellules endothéliales microvasculaire cérébrales (stades tardifs) soit sur des cellules du commerce après plusieurs passages (stade très jeune). Expression de gènes : extraction d’ARN, dosages et contrôle de qualité, Amplification et mesure par « Quantitative Multiplex Polymerase avec Sondes Fluorescentes (QMPSF) ». La QMPSF sera réalisé en collaboration avec la plateforme de génomique (Prs T Frébourg, JM Flaman). Biochimie des protéines (extractions, dosage, western blot, immunohistochimie, ELISA) Etudes d’acticités enzymatiques (zymographie en gel SDS-PAGE sur substrats de gélatine, caséine et/ou plasminogène ; cyto-zymographie au moyen de substrats fluorescents ; DQ-gélatine, DQ-caséine)

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