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Etude du rôle de la phosphatase cdc25 dans la régulation de la synthèse d’ADN dans l’embryon d’ascidie.

proposé par Rémi DUMOLLARD, UMR7009, Laboratoire de Biologie du Développement, Station Zoologique de Villefranche sur Mer, 06230 Villefranche sur Mer

Projet de stage : Dans l’embryon d’ascidie, la spécification des lignages cellulaires est réalisée dans un contexte de clivages invariants durant lesquels le timing de division cellulaire et l’orientation des plans de clivages sont précisément définis pour chaque cellule de l’embryon. Ainsi la durée du cycle cellulaire doit être rallongée au cours du développement pour permettre la morphogenèse stéréotypée de l’embryon. Cdc25 est la phosphatase activant les cyclin dependant kinases (cdk) qui régule l’entrée en phase S et l’entrée en phase M. L’embryon d’ascidie ne possède qu’un seul isoforme de cdc25 qui récapitule l’action des 3 cdc25 mammifères. Il est cependant encore inconnu comment cdc25 participe à la régulation du cycle cellulaire dans les embryons d’ascidie. Nous avons découvert que cdc25 (ainsi que la cycline E) se retrouve en interphase sur les foci de réplication d’ADN (ou « replication factories ») et sur les centrosomes. Ces résultats suggèrent que cdc25 pourrait réguler à la fois la durée du cycle cellulaire et l’orientation des fuseaux mitotiques. Lors de ce projet l’étudiant devra confirmer le rôle majeur de cdc25 dans la régulation du cycle cellulaire et établir comment cdc25 régule le pattern de division dans l’embryon précoce.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Clonage de gènes d’intérêt à partir d’une banque de cDNAs. Synthèse in vitro d’ARNm cappés codant pour des GFPs (Venus, YFP, GFP, RFP). Imagerie de fluorescence conventionnelle, confocale et biphotons et imagerie de déconvolution. Fécondation et culture d’embryons marins. Micro injection d’œufs et embryons d’ascidie.

Remarque : l’hébergement est sur le site de la station marine et est pris en charge par notre laboratoire

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