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Etude du transporteur anionique TAT1 dans les asthénozoospermies humaines

proposé par Aminata Touré, Institut Cochin, CNRS UMR8104, INSERM U567, Université René Descartes, 22 rue Mechain, 75014 PARIS

Projet de stage : La protéine TAT1/Slc26A8 (Testis Anion Transporter 1) est un transporteur d’anions spécifiquement exprimé dans les cellules germinales en cours de spermatogenèse. Nous avons généré par recombinaison homologue, des souris délétées pour le gène Tat1 et caractérisé leur phénotype. De manière intéressante, les souris homozygotes mâles Tat1-/- sont totalement stériles ; les spermatozoïdes Tat1-/- présentent des défauts de structure du flagelle (disjonction entre les pièces intermédiaire et principale du flagelle), une absence totale de mobilité et des défauts de capacitation. TAT1 appartient à la famille des transporteurs anioniques SLC26 dont plusieurs membres chez l’homme, présentent des mutations "perte de fonction" conduisant à des maladies. Du fait de l’expression exclusive de Tat1 dans les cellules germinales mâles, chez l’homme comme chez la souris, nous proposons d’étudier l’implication de Tat1 dans les infertilités humaines.

Pour cela, nous avons mis en place, en collaboration avec le Service de Biologie de la Reproduction de l’Hôpital Cochin (Pr Jouannet & Pr Wolf), l’analyse systématique des patients asthénozoospermiques consultant le service. Nous analyserons la séquence du gène TAT1 de ces patients ainsi que l’expression de la protéine TAT1 par immunofluorescence sur frottis de sperme. Par ailleurs nous nous intéressons aux voies de signalisation mises en jeu au cours des processus de mobilité et d’hyperactivation des spermatozoïdes. Nous étudierons notamment, par immunofluorescence sur frottis de spermatozoïdes, la localisation subcellulaire de protéines susceptibles de réguler ces processus.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :

•Biologie moléculaire : Amplification d’ADN génomique à partir de sperme, PCR, DHPLC, séquençage. •Immunofluorescence sur étalements de spermatozoïdes murins et humains •Analyse informatique : sélection des patients sur dossier informatique Excel ; analyses et alignements multiples de séquences (nucléiques et protéique)

Documents joints

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