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Etudes fonctionnelles de mutants impliqués dans l’axe gonadotrope.

proposé par Anne GUIOCHON-MANTEL, INSERM U693, « Récepteurs stéroïdiens, Physiopathologie endocrinienne et métabolique », Faculté de médecine Paris-Sud, 63 rue Gabriel Peri, 94276 Le Kremlin-Bicêtre Cedex

Projet de stage : Les hypogonadismes hypogonadotropes congénitaux se répartissent schématiquement en deux catégories : les hypogonadismes isolés et le syndrome de Kallmann dans lequel l’hypogonadisme s’associe à une anosmie. Nous nous intéressons aux gènes impliqués dans les hypogonadismes hypogonadotropes isolés. Nous avons mis en évidence la première mutation de la GnRH1 (ref 6), ce qui est la première description de l’invalidation d’un peptide hypophysiotrope chez l’homme. Plus récemment, des mutations faux sens des gènes de la neurokinine B (TAC3) et de son récepteur (TACR3) ont été identifiées montrant que ce peptide jouait un rôle dans l’axe gonadotrope. Nous avons mis en évidence de nouvelles mutations de ces gènes invalidant totalement leur fonction et pu démontrer que la neurokinine B agissait au niveau hypothalamique (ref 10). Nous venons d’isoler de nouveaux mutants de TACR3. Le projet est de tester l’activité de ces mutants sur la signalisation de la neurokinine B (activation de la voie de la phospholipase C par l’étude de la signalisation calcique et activation des MAP kinases par l’étude de la phosphorylation de Erk et de l’activation d’un gène rapporteur SRE-luc). Ceci nous permettra d’établir des relations génotype–phénotype, de mieux comprendre les relations structure-fonction de ce récepteur et de préciser la prévalence réelle de ces mutations dans l’hypogonadotrope congénital isolé.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Le stage permettra d’apprendre les techniques classiques de biologie moléculaire (constructions), de culture cellulaire et de signalisation :
  Mutagenèse dirigée
  Culture de cellules
  Transfection cellulaire
  Etude de la signalisation calcique
  Etude de la signalisation par les MAPK (western blot, gène rapporteur-luciférase)
  Immunocytochimie

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