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Exploration du mécanisme d’action de Spaca6 dans l’adhésion/fusion des gamètes et des trophoblastes 

proposé par Ahmed ZIYYAT, Génomique, Epigénétique et Physiopathologie de la Reproduction Institut Cochin Inserm U-1016 , 75014PARIS

Projet de stage : La fusion cellulaire joue un rôle clef dans de nombreux processus physiologiques et pathologiques. La fusion d’un spermatozoïde et d’un ovocyte marque le début de la vie et les cellules du trophoblaste fusionnent entre elles pour former le placenta. Au cours du développement, les ostéoclastes et les fibres musculaires résultent de la fusion de précurseurs respectivement d’origine monocytaire ou myoblastique. La compréhension des mécanismes de fusion entre deux cellules présente des intérêts multiples. Peu de gènes sont connus pour leur implication indispensable à l’interaction gamétique au moment de la fécondation. Des souris mâles dont une portion chromosomique contenant le gène Spaca6 a été délétée sont stériles par défaut de fusion des spermatozoïdes qui s’accumulent dans l’espace périvitellin . Nous avons confirmé la présence de Spaca6 sur les spermatozoïdes de souris et humains et montré qu’un anticorps anti-Spaca6 était capable d’inhiber la fécondation in vitro. Par ailleurs, nous avons montré que Spaca6 est également exprimé dans les trophoblastes, cellules placentaires, qui fusionnent en syncytiotrophoblaste. Or des défauts de fusion sont associés à une pathologie majeure de la grossesse, la prééclampsie et des résultats de transcriptome montrent que l’expression de Spaca6 est fortement diminuée dans les placentas prééclamptiques . En utilisant le système CRISPR/Cas9, nous générons une souris invalidée pour Spaca6 afin de mieux caractériser son phénotype et d’étudier l’influence de son absence à la fois sur la fécondation et sur la syncytialisation trophoblastique. Références Lorenzetti D, Poirier C, Zhao M, Overbeek PA, Harrison W, Bishop CE. 2014. A transgenic insertion on mouse chromosome 17 inactivates a novel immunoglobulin superfamily gene potentially involved in sperm-egg fusion. Mammalian genome : official journal of the International Mammalian Genome Society 25:141-148. Nishizawa H, Pryor-Koishi K, Kato T, Kowa H, Kurahashi H, Udagawa Y. 2007. Microarray analysis of differentially expressed fetal genes in placental tissue derived from early and late onset severe pre-eclampsia. Placenta 28:487-497.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : PCR, RT-PCR, Western blot, Co-immunoprécipitation, Croisement de souris, Fécondation in vitro, Histologie, Immunofluorescence, Microscopie confocale, Culture cellulaire, Transfection de siRNA

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