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Expression de la protéine ovocytaire Juno par l’ovocyte humain et implication dans la fusion gamétique

proposé par Virginie Barraud-Lange ,Génomique, Epigénétique et Physiopathologie de la Reproduction Institut Cochin Inserm U-1016

Projet de stage : Parmi les acteurs moléculaires membranaires impliqués dans l’adhésion/fusion des gamètes chez les mammifères, seuls trois, l’immunoglobuline spermatique Izumo1 , son récepteur ovocytaire récemment caractérisé Juno et la tétraspanine Cd9 ovocytaire se sont révélées essentielles . Izumo et CD9 ont été identifiés à la surface des gamètes humains et jouent un rôle important au cours de la fécondation . Il n’existe actuellement pas de donnée concernant l’expression et l’implication de la molécule Juno chez l’humain. L’interface entre notre laboratoire de recherche et notre laboratoire d’Assistance Médicale à la Procréation (AMP), nous permet un accès aux ovocytes humains (conformément au code de la Santé Publique du 28/10/2013, partie I, livre II). Nous avons identifié la protéine Juno humaine et produit des anticorps monoclonaux chez la souris utilisables en immunofluorescence, en immunoprécipitation ou en western blot. Grâce à ce nouvel outil, nous étudierons l’expression de la molécule Juno (en parallèle avec CD9) à la surface de l’ovocyte humain aux différents stades de maturité : vésicule germinative (VG), ovocyte en métaphase de 1ère division de méiose (M1) et de deuxième division de méiose (M2) ; ainsi qu’après la fécondation (Bianchi et al., 2014). L’implication de Juno dans la fusion gamétique humaine sera également recherchée au cours de test de fécondation in vitro. Les ovocytes seront au préalable dépellucidés afin d’éviter la production de zygote. Par ailleurs, nous rechercherons des mutations au niveau de la séquence codante ou dans le promoteur du gène de Juno chez des patientes prise en charge en AMP et ayant présenté un échec de fécondation in vitro.

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