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Facteurs impliqués dans la production de crossing overs lors de la réparation des cassures double-brin méiotiques

proposé par Valérie BORDE , Institut Curie – UMR218 Dynamique des chromosomes et recombinaison 75248 Paris cedex 05

Projet de stage : situation du sujet, objectif du stage, approches expérimentales

Notre équipe étudie le mécanisme de la formation et de la réparation des cassures double-brin (CDBs) méiotiques, chez l ‘organisme modèle, la levure Saccharomyces cerevisiae. Grâce aux outils disponibles, à la possibilité d’induire la méiose de manière synchrone, et à la cartographie disponible des sites de CDBs, cet organisme est en effet un modèle de choix pour l’étude des mécanismes moléculaires mis en jeu lors de la recombinaison méiotique. Parmi les CDBs formées, seule une partie est réparée en formant un crossing over, dans des proportions variables suivant les organismes : 1/2 chez S. cerevisiae, 1/10 chez l’homme et la Souris. Plusieurs protéines sont impliquées dans la formation des crossing over, mais leur rôle respectif dans ce processus n’est pas bien caractérisé. L’objectif du stage est d’explorer le mode de recrutement d’une de ces protéines, dont nous avons récemment montré qu’elle s’associe avec la chromatine aux sites de cassures double-brin. Pour cela, différents mutants seront étudiés, affectant soit la formation ou la réparation des cassures, soit une autre protéine de crossing over. Les approches utilisées seront l’immunoprécipitation de la chromatine et l’immunofluorescence sur des étalements de chromosomes pour visualiser les sites d’association de la protéine le long des chromosomes, ainsi que des approches classiques de génétique de la levure.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :

  Immunoprécipitation de la chromatine et PCR quantitative
  Etalement de chromosomes suivi d’immunofluorescence
  Techniques classiques de biologie moléculaire et génétique de la levure

Documents joints

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