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Fusion des cellules trophoblastiques humaines

proposé par Guillaume Pidoux, INSERM - Paris (75)

Projet de stage : Par des approches de cAMP et de PKA pull down assays associées à des études de spectrométrie de masse ainsi que du silencing par siRNA, nous avons montré que les AKAPs sont indispensables à la fusion en permettant l’ancrage de la PKA. En revanche la composition des complexes associés aux AKAPs ainsi que leur régulation et les événements moléculaires induisant la fusion cellulaire n’ont pas été décrits. Nous souhaitons confirmer les résultats obtenus par spectrométrie de masse en étudiant l’association de ces protéines à la PKA, leur rôle dans la fusion et leur régulation au cours du processus de fusion cellule-cellule. A partir du modèle de culture primaire de cellules placentaires humaines ou de lignée cellulaire BeWo (lignée de choriocarcinome), l’étudiant devra confirmer par co- immunoprécipitation et immunocytochime, la composition et la localisation de ces complexes protéiques. Une approche par siRNA associé à des études de siRNA “rescue” seront utilisées pour confirmer le rôle des ces protéines dans la fusion cellulaire. Des études du statut de phosphorylation des protéines associées à ces complexes seront réalisés pour confirmer le rôle de régulation de la PKA. Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Culture cellulaire : culture de lignée BeWo et culture primaire Biologie Moléculaire : siRNA, clonage et mutation sur plasmide, transformation et transfection Biochimie : Co-immunoprécipitation, immunoblot, immunocytochime

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