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Implication des protéines du pore nucléaire dans la différenciation des cellules souches embryonnaires.

proposé par Valérie DOYE, Equipe : "Pores nucléaires : transport et cycle cellulaire" Institut Jacques Monod - UMR 7592 CNRS - Université Paris Diderot-Paris7 75 PARIS CEDEX 13

Projet de stage : situation du sujet, objectif du stage, approches expérimentales

Chez les eucaryotes, les échanges entre noyau et cytoplasme s’effectuent au niveau de larges complexes protéiques appelés pores nucléaires (NPC), qui sont composés d’une trentaine de protéines distinctes, les nucléoporines. Nos travaux visent à caractériser, au delà de leur rôle dans le transport des molécules entre le cytoplasme et le noyau, les fonctions non-conventionnelles des pores nucléaires et de leurs constituants dans la division, la différentiation cellulaires, le développement et le métabolisme nucléaire. En collaboration avec l’équipe de Liz Lacy, nous avions décrit que la perte de la sous-unité Nup133 du pore nucléaire affectait le développement embryonnaire et la différenciation des cellules souches embryonnaires [1]. Nous avons de plus caractérisé l’implication du domaine N-terminal de Nup133 dans le positionnement des centrosomes en prophase et les étapes précoces de la mise en place du fuseau mitotique [2]. Enfin récemment, l’implication de Nup133 dans la migration apicale des noyaux des progéniteurs neuraux a été démontrée [3]. Grace à l’utilisation de cellules souches embryonnaires invalidées pour Nup133 nous cherchons à caractériser les mécanismes moléculaires par lesquels Nup133 participe au développement et à la différenciation cellulaire.

[1] Lupu F et al 2008 Dev Cell 14:831-42. Nuclear pore composition regulates neural stem/progenitor cell differentiation in the mouse embryo [2] Bolhy S et al 2011 J Cell Biol 192:855-71. A Nup133-dependent NPC-anchored network tethers centrosomes to the nuclear envelope in prophase [3] Hu DJ et al 2013 Cell 154(6) :1300-13. Dynein recruitment to nuclear pores activates apical nuclear migration and mitotic entry in brain progenitor cells.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :

Dans le cadre de ce stage, l’étudiant cultivera des lignées de cellules souches embryonnaires (sauvages, Nup133-/-, ou Nup133-/- exprimant des formes mutantes de Nup133) et caractérisera leur différenciation en neurones. Il réalisera leur analyse phénotypique en combinant des approches d’immunofluorescence et de microscopie, de PCR quantitative et de western blot sur des extraits ARN et protéiques de ces cellules.

Documents joints

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