print

> Stages de M2 > Liste des stages proposés pour l année 2018-2019 > : Isoforme placentaire de la NADPH oxydase dans le trophoblaste humain : (...)

 : Isoforme placentaire de la NADPH oxydase dans le trophoblaste humain : Implication dans la pathogenèse de la pré-éclampsie

proposé par Amal Zerrad-Saadi,, Laboratoire : UMR-S 1139 Université Paris Descartes Faculté de pharmacie 75006 Paris

Projet de stage : La villosité choriale est l’unité structurale et fonctionnelle du placenta humain dont la composante cellulaire majeure est le cytotrophoblaste villeux (CTV). A partir de 10 semaines d’aménorrhée (SA), les bouchons cytotrophoblastiques obstruant les artères utérines spiralées se délitent progressivement, laissant entrer dans la chambre intervilleuse le sang artériel maternel oxygéné. Cet afflux de sang est responsable d’une augmentation de la pression partielle en O2 dans la chambre intervilleuse qui passe de 20 à 60mmHg entre 10 SA et 12-14 SA, entrainant la production d’espèces réactives de l’oxygène (ERO) et potentiellement un stress oxydant au niveau de la villosité choriale. Face à cette transition environnementale, la villosité choriale met en place un système de défense anti-oxydant afin de maintenir une homéostasie redox. L’adaptation des CTV à ce changement d’environnement est essentiel pour le développement placentaire, la croissance fœtale et l’issue de la grossesse. La principale difficulté pour le trophoblaste est de répondre de manière appropriée à cette modification du potentiel pro-oxydant ; son incapacité à effectuer cette transition pourrait être à l’origine de la survenue de pathologies obstétricales telles que la pré-éclampsie, le retard de croissance intra-utérin ou encore la fausse couche spontanée. Au sein de notre équipe nous avons démontré que la source principale de production d’ERO au premier trimestre de la grossesse est la NADPH oxydase (Nox) et que son activité est augmentée dans des villosités placentaires à 7-9 SA comparé à 12-14 SA. Nos résultats montrent également que l’augmentation de l’activité de la Nox est associée à une activation de la voie p38 MAPK. Ce travail est en cours de révision dans Cellular Physiology and Biochemistry (I. Hernandez et al). Il existe 7 isoformes de la Nox de (Nox1 à Nox5 et Duox1/2). Nous avons récemment identifié l’expression des Nox2, Nox4 et Nox5 dans le trophoblaste humain et nous nous intéressons à l’identification de l’isoforme de la Nox qui active ou contribue à la sécrétion du soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1). Le sFlt-1 un facteur anti-angiogénique décrit comme étant impliqué dans la survenue de la pré-éclampsie et dont les taux sériques maternels peuvent être utilisés comme test prédictif dans la survenue de cette pathologie.

Les objectifs de ce travail de M2 seront : (i) La validation de l’isoforme placentaire de la Nox impliquée dans la synthèse/sécrétion de sFLt1, en utilisant des siRNA spécifiques des Nox2, Nox4 et Nox5, ainsi que son impact sur la différenciation trophoblastique par immunofluorescence et mesure de l’index de fusion ; (ii) L’étude des différents cofacteurs de la forme active de la Nox placentaire précédemment identifiée en (i) par immunoprécipitation ; (iii) La caractérisation des modifications post-traductionnelles (phosphorylation, glycosylation…) de cette isoforme placentaire par gel 2D et spectrométrie de masse (Plateforme de l’Institut Cochin)

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Culture cellulaire, siRNA, index de fusion, immunomarquages, western blot, immunoprécipitation, électrophorèse en gel 2D.

Documents joints

- Site propulsé par Spip 1.9 -
-- Master de reproduction et développement - http://www.reprodev.fr --