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L’expression des LXRs par les cellules de la granulosa est elle un bon moyen de mesurer les chances de grossesses en fécondation in vitro ?

tage proposé par Pr Florence BRUGNON (PU-PH) Assistance Médicale à la Procréation-CECOS CHU Estaing 1 place Aubrac 63000 CLERMONT FERRAND

Projet de stage  : Les Liver X Receptors (LXRs) ont été rapportés comme des facteurs directement impliqués dans la régulation de la stéroïdogenèse. Les LXRs sont des facteurs de transcription appartenant à la superfamille des récepteurs nucléaires ayant pour ligand les oxystérols. Ces récepteurs sont particulièrement impliqués dans le contrôle de l’homéostasie lipidique. Dans l’ovaire, les LXRs sont impliqués dans la régulation de la stéroïdogenèse et la reprise de la méiose ovocytaire. Les souris Lxrαβ-/- (dépourvues en LXRs) présentent une stérilité vers l’âge de 10 mois avec des altérations de la méiose de leurs ovocytes. Des résultats préliminaires de notre laboratoire sur les souris ré-exprimant uniquement LXRβ dans les cellules de la granulosa (souris nommées Lxrαβ-/-TgLxrβ) ont démontré la disparition de ces signes chez les souris dépourvues en LXRs. L’ensemble de ces données démontre donc l’importance des LXRs dans la fonction ovarienne lors d’une stimulation de l’ovulation. L’objectif du stage sera donc d’évaluer l’implication potentielle des LXRs dans le processus de fécondation chez l’Homme. Nous proposons pour cela d’analyser la corrélation entre les niveaux d’expression des LXRs cibles dans les cellules de granulosa avec la qualité des ovocytes ponctionnés et fécondés en fécondation in vitro. Ainsi, l’impact de l’expression des LXRS sur la qualité du développement embryonnaire précoce et les chances de grossesse sera analysé. Pour mener à bien ce projet l’étudiant réalisera une mesure des transcrits des LXRs exprimés par les cellules de la granulosa par qPCR et recueillera les données des issues des tentatives de fécondation in vitro de ces patientes.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : extraction ARN, qPCR, analyse du développement embryonnaire précoce par microscopie optique, recueil de données cliniques associées (issues de fécondation in vitro)

Publications du responsable de stage au cours des 5 dernières années : Rondanino C, Ouchchane L, Chauffour C, Marceau G, Déchelotte P, Sion B, Pons-Rejraji H, Janny L, Volle DH, Lobaccaro JM, Brugnon F (2014) Level of liver X receptors in testicular biopsies of patients with azoospermia. Fertil Steril 102, 361-371. Brugnon F, Ouchchane L, Pons-Rejraji H, Artonne C, Farigoule M, Janny L (2013) Density gradient centrifugation prior to cryopreservation and hypotaurine supplementation improve post-thaw sperm quality of infertile men with oligoasthenoteratozoospermia. Epub ahead of print, Hum Reprod 28, 2045-2057 Sanfilippo S, Canis M, Romero S, Sion B, Dechelotte P, Pouly JL, Janny L, Smitz J, Brugnon F (2012) Quality and functionality of human ovarian tissue after cryopreservation using an original slow freezing procedure. J Assisted Reprod Genet 30, 25-34. Elinati E, Kuentz P, Redin C, Jaber S, Vanden Meerschaut F, Makarian J, Koscinski I, Nasr-Esfahani MH, Demirol A, Gurgan T, Louanjli N, Iqbal N, Nisharah M, Pigeon FC, Gourabi H, De Briel D, Brugnon F, Gitlin SA, Grillo JM, Ghaedi K, Deemeh MR, Tanhaei S, Modarres P, Heindryckx B, Benkhalifa M, Nikiforaki D, Oehninger SC, De Sutter P, Muller J, Viville S (2012) Globozoospermia is mainly due to DPY19L2 deletion via non-allelic homologous recombination involving two recombinations hotspots. Hum Mol Genet 21, 3695-3702. Brugnon F, Pons-Rejraji H, Artonne C, Janny L, Grizard G (2012) The limits for detection of activated caspases of spermatozoa by western blot in human semen. Andrologia 44, 265-272. Sanfilippo S, Canis M, Ouchchane L, Botchorishvili R, Artonne C, Janny L , Brugnon F (2011) Viability assessment of fresh and frozen/thawed isolated human follicles : reliability of two methods (Trypan blue and Calcein AM/ethidium homodimer-1) J Assisted Reprod Genet 28, 1151-1156. Brugnon F, Janny L, Communal Y, Darcha C, Szczepaniak C, Pellestor F, Vago P, Pons-Rejraji H, Artonne C, Grizard G (2010) Apoptosis and meiotic segregation in ejaulated sperm from Robertsonian transocation carrier patients. Hum Reprod 25, 1631-42.

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