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Liens entre CD9 et cytosquelette lors de l’adhésion/fusion des gamètes

proposé par Ahmed Ziyyat, INSERM, Université Paris-Descartes, Paris

Projet de stage : En comparant les forces de rupture développées lors de la séparation d’un spermatozoïde lié soit à un ovocyte sauvage soit à un ovocyte délété de la tétraspanine CD9, nous avons décrit deux types de forces en présence dont un disparaît en absence de CD9. Celui qui dépend de CD9 est le seul capable de conduire à la fusion. Il correspond à des interactions où un lien s’établi entre le spermatozoïde et la membranaire ovocytaire et un autre plus fort s’établi entre la membrane et le cytosquelette ovocytaire. Ce lien se fait vraisemblablement via des partenaires directs de CD9 tels que EWI-2 et EWI-F, présents à la fois sur des cellules somatiques et sur les ovocytes. Par ailleurs, ces partenaires de CD9 se lient directement aux molécules Ezrin-Radixin-Moesin (ERM) qui connectent le cytosquelette d’actine à la membrane plasmique. Notre projet consiste à inhiber l’expression d’EWI et d’ERM par ARN interférence dans l’ovocyte ce qui devrait se traduire par la perte du lien entre CD9 et le cytosquelette et par conséquent par la disparition des adhésions fortes. Les conséquences de cette perte seront évaluées en fécondation in vitro puis en mesure de force.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Super ovulation des souris, préparation des gamètes mâles et femelles de souris, microinjection des ARN interférents au stade VG, maturation in vitro des ovocytes, vérification de l’inhibition par RT-PCR, Western Blot et Immunofluorescence. Fécondation in vitro et mesures des nanoforces par micromanipulation. Participation à l’analyse statistique et l’interprétation des courbes obtenues.

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