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Localisation des sites PRDM9 chez la souris femelle.

proposé par Corinne GREY, IGH UPR 1142, 141 rue de la Cardonille, 34396 Montpellier

Projet de stage : En 2010 nous avons identifié une protéine, PRDM9, qui désigne les endroits dans le génome qui sont reconnus et cassés par la machinerie de recombinaison méiotique. PRDM9 est une histone méthyl transférase qui modifie la chromatine en apposant la marque H3K4me3. Elle choisit les histones à modifier à proximité de ses motifs de liaison à l’ADN qu’elle trouve grâce à son domaine à doigts de Zinc. Le domaine à doigt de Zinc de PRDM9 est sous pression de sélection positive forte, faisant d’elle la protéine mammifère qui évolue le plus rapidement dans le génome. Par conséquence dans une espèce donnée, notamment chez l’homme, il existe un grand nombre d’allèles différents de PRDM9. Ces différents allèles reconnaissent différents motifs de fixation, permettant ainsi à la machinerie de recombinaison de couper à différents endroits. La carte génétique des individus ayants différents allèles de PRDM9 est donc différente. De manière surprenante, bien qu’au sein d’une même lignée de souris, les mâles et femelles possèdent le même allèle de PRDM9, il semble y avoir des différences dans la distribution des évènements de recombinaison. Par la méthode de ChIP-séquençage nous avons déjà étudié la localisation de sites de fixation de PRDM9 chez le mâle. Le sujet de stage sera d’adapter ce protocole chez la femelle et de comparer les résultats entre les deux sexes.

Techniques utilisées  :
  Dissection d’embryons de souris afin d’extraire les ovocytes en méiose
  Préparation et Imunoprécipitation de la chromatine (ChIP)
  Purification d’Anticorps par affinité à partir de sérums congelés
  Western-blot
  Colorations Immunofluorescence

Documents joints

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