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MISS et la stabilisation du fuseau de méiose II

proposé par Marie-Hélène Verlhac, UMR7622, Biologie du Développement, 9 quai St Bernard, Bat C, 5e, 75005 Paris

Projet de stage : L’arrêt des ovocytes de vertébrés en seconde phase M de méiose (arrêt CSF, CytoStatic Factor) permet l’attente de la fécondation. Durant cet arrêt prolongé, il est important de stabiliser le fuseau de division afin que celui-ci soit apte à ségréger les chromatides sœurs à la fécondation. Nous avons identifié Miss, un partenaire de la MAPK, substrat de cette dernière, qui est nécessaire au maintien d’un fuseau bipolaire en métaphase II. Au cours de ce stage, il s’agira de répondre à trois questions : Quel est le rôle physiologique de Miss, et ce par l’analyse de souris invalidées pour le gène Miss ? Miss est-t’elle régulée par la RanGTPase qui est essentielle au contrôle de l’arrêt CSF ? Miss est-t’elle régulée par phosphorylation via la MAPK ? Afin de répondre à ces questions des mutants ponctuels de Miss seront exprimés lors de la maturation méiotique dans les ovocytes dépourvus de Miss et les conséquences seront analysées : mutants dans la NLS (Nuclear Localizing Signal) pour la deuxième question et mutants des sites potentiels de phosphorylation pour la troisième question.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Manipulation des ovocytes de souris, biologie moléculaire (clonage, sous clonage, transcription in vitro, génotypage des souris transgéniques), micro-injection d’ARN, immunofluorescence, confocal, vidéomicroscopie

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