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Mécanismes moléculaires du développement alvéolaire, rôle du facteur Wnt5a

proposé par Jacques Bourbon, Inserm U841-IMRB, Equipe pathologies des épithéliums respiratoires et du développement pulmonaire , Faculté de Médecine, 8 rue du Général Sarrail, 94010 Créteil

Projet de stage : La dysplasie bronchopulmonaire est une maladie chronique fréquente du nouveau-né prématuré, caractérisée principalement par un arrêt de l’alvéolisation pulmonaire. Une étude du transcriptome (puces à ADN) récemment réalisée par l’équipe a mis en évidence des gènes nouveaux régulés au cours du processus d’alvéolisation. Ces régulations sont gravement altérées dans deux modèles expérimentaux d’arrêt de l’alvéolisation. Parmi les gènes les plus fortement induits figure un médiateur diffusible, Wingless-type MMTV integration site 5a (Wnt5a). Un rôle de ce facteur dans le développement vasculaire (angiogenèse) a été montré dans d’autres organes. Compte tenu de l’importance de l’angiogenèse dans le développement alvéolaire, nous faisons l’hypothèse que ce facteur pourrait être le médiateur d’un contrôle du développement des cellules endothéliales par les cellules interstitielles (fibroblastes) qui l’expriment. Pour tester cette hypothèse, des cellules endothéliales d’une lignée microvasculaire pulmonaire humaine seront cultivées en présence de Wnt5a recombinant, de milieu conditionné par des fibroblastes pulmonaires, ou co-cultivées avec les fibroblastes. La suppression de Wnt5a sera réalisée à l’aide d’un anticorps neutralisant et d’ARN interférants. On analysera les conséquences sur la prolifération endothéliale et l’expression de protéines impliquées dans ce processus (VEGFR2/KDR, récepteur de l’angiopoiétine, endogline).

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Cultures cellulaires (lignées et primaires), utilisation d’anticorps neutralisants et d’ARN interférants, étude de la prolifération cellulaire (incorporation de précurseur marqué, marquage PCNA), RT-PCR quantitative (« temps réel »), western blot, histologie, histochimie et immunohistochimie, dosages biochimiques divers (ADN, protéines).

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