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Méthylation et hydroxyméthylation de l’ADN dans les embryons : effet de perturbations lors du développement précoce

proposé par Juliette Salvaing et Nathalie Beaujean, INRA - Jouy en Josas (78)

Projet de stage : La méthylation de l’ADN est une des modifications épigénétiques les plus étudiées. Elle est très importante pour le développement embryonnaire puisque l’absence des enzymes responsables de la mise en place de cette marque, les ADN méthyltransférases, entraîne la létalité embryonnaire. Chez la souris, l’ADN est déméthylé de façon asymétrique : alors que la méthylation du génome maternel est perdue passivement par dilution au cours des divisions cellulaires successives, c’est un mécanisme actif qui intervient pour déméthyler le génome paternel. Le mécanisme de déméthylation active n’est pas encore complètement compris, mais il a été montré récemment que l’ADN méthylé peut être oxydé, ce qui pourrait constituer la première étape de la déméthylation active. Cependant, les études menées à ce jour suggèrent que le rôle de l’hydroxyméthylation de l’ADN ne peut se résumer à un rôle d’intermédiaire de déméthylation et que cette nouvelle marque épigénétique pourrait être notamment impliquée dans la mise en place ou le maintien de la pluripotence. L’objectif de ce stage est d’étudier les dynamiques de méthylation et d’hydroxyméthylation dans des embryons de souris ou de lapin dont le développement préimplantatoire est perturbé, soit par la culture in vitro, soit plus profondément (embryons issus de clonage par transfert de noyau).

Techniques mises en œuvre par le stagiaire La récolte ainsi que la manipulation d’embryons de souris ou de lapin sous loupe binoculaire. Les techniques d’immunomarquage, combinées ou non à l’hybridation in situ d’ADN (ImmunoFISH) et d’imagerie de fluorescence (observation au microscope confocal ou ApoTome). L’analyse des images se fait ensuite à l’aide du logiciel ImageJ.

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