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 : Recherche de nouveaux gènes impliqués dans la détermination du sexe normale et pathologique chez l’homme

proposé par Pierre CALVEL, Unité de Génétique du Développement Humain, Institut Pasteur 75724, PARIS

Projet de stage : Les analyses génétiques de cas de Désordres du Développement Sexuel (DSD) avec dysgénésie gonadique, notamment réalisées au laboratoire par séquençage d’exome, ont permis d’identifier plusieurs mutations ponctuelles dans des gènes jusqu’alors inconnus pour leur rôle dans le déterminisme sexuel de la gonade chez l’homme. Le présent projet vise à valider et étudier 2 des gènes récemment identifiés, tous deux actifs au sein de la même voie de signalisation cellulaire, en combinant diverses approches cellulaires et moléculaires : - Clonage des gènes et reproduction des mutations par mutagenèse dirigée ; étude de leurs effets sur la structure et la fonction des protéines correspondantes, sur leur localisation subcellulaire et sur leur interaction avec divers facteurs importants pour le développement testiculaire ou ovarien (Gel retard, test luciférase, co-immunoprécipitation – pour exemple, lire : Lourenço et al, PNAS, 2011). - Etude de l’expression des gènes candidats dans les gonades fœtales de souris et humaine (PCR quantitative selon disponibilités des échantillons, Immunofluorescence sur coupe)
- Analyse fonctionnelle par culture organotypique de gonades fœtales de souris, évaluation de l’effet de l’inhibition de l’expression, de l’activité ou de la voie de signalisation des protéines concernées sur le développement gonadique (utilisation d’une lignée de souris transgénique exprimant la protéine fluorescente GFP dans les ovaires et testicules fœtaux, permettant le tri par FACS des cellules supportrices)

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : PCR, clonage bactérien, test d’activité de la Luciferase, Co-immunoprécipitation, PCR quantitative, immunohistochimie, manipulation de souris transgéniques, dissection d’embryons et de gonades fœtales de souris, culture de gonades fœtales, FACS.

Documents joints

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