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Recherche de nouveaux gènes impliqués dans la détermination du sexe chez l’homme : investigation de cas cliniques et modélisation fonctionnelle de mutations en modèle cellulaire et murin

proposé par Pierre Calvel , Unité de Génétique du Développement Humain (GDH) 75 PARIS Cedex 15

Projet de stage :

Une des propriétés les plus fascinantes observées dans les espèces effectuant la reproduction sexuée est la capacité de la gonade embryonnaire à se différencier en un testicule ou un ovaire à partir d’un état sexuellement indifférencié. Chez l’homme, toute anomalie de ce processus appelé détermination du sexe peut entraîner des troubles regroupés sous le terme de « désordres du développement sexuel » (DSD). Ces maladies rares et hétérogènes, le plus souvent d’origine génétique, restent inexpliquées dans la plupart des cas. Depuis plusieurs années, le laboratoire de Ken McElreavey a mis en place un séquençage systématique de l’ADN de plus de 200 cas non résolus de DSD avec dysgénésie gonadique, afin d’identifier d’éventuelles mutations pathogéniques chez ces patients.

Le présent projet vise à valider et étudier un des gènes récemment identifiés par ce crible, en combinant diverses approches cellulaires et moléculaires : - Reproduction des mutations par mutagenèse dirigée et étude de leurs effets sur la structure et la fonction de la protéine correspondante (Gel retard, test luciférase – pour exemple, lire : Lourenço et al, PNAS, 2011). - Etude de l’expression du gène candidat lors de la détermination du sexe chez la souris et analyse fonctionnelle par culture organotypique de gonades fœtales (utilisation d’une lignée de souris transgénique exprimant la protéine fluorescente GFP dans les ovaires et testicules fœtaux)

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :

- Le stagiaire apprendra à maîtriser les techniques suivantes : PCR, clonage bactérien, test d’activité de la Luciferase, PCR quantitative, immunohistochimie.
- Le stagiaire aura la possibilité d’observer et de s’initier aux techniques suivantes : manipulation de souris transgéniques, dissection d’embryons et de gonades fœtales de souris, culture de gonades fœtales.

Documents joints

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