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Recherche de promoteurs géniques capables de cibler l’expression de transgènes dans la gonade de poissons transgéniques GFP

proposé par Jean-Jacques LAREYRE, Station Commune de Recherche en Ichtyophysiologie, Biversité et Environnement (SCRIBE), Campus de Beaulieu, bâtiment 16, 35042 Rennes cedex

Projet de stage : Le sujet de stage proposé s’inscrit dans le cadre d’un contrat de recherche (SPERMGEN) financé par l’ANR qui vise à explorer in vivo, par transgénèse, l’impact physiologique de gènes (préalablement sélectionnés par des approches transcriptomiques) sur l’initiation et/ou le déroulement de la gamétogenèse chez les poissons. Le stage de Master 1 consistera à caractériser des lignées de poissons transgéniques produites dans l’objectif d’identifier des fragments d’ADN promoteur qui pourront, par la suite, être utilisés pour modifier la fonction de gènes d’intérêt spécifiquement dans la gonade. Les fragments d’ADN promoteurs testés sont issus de gènes exprimés préférentiellement dans la gonade. Ils ont été d’abord fusionnés à un gène rapporteur codant pour la GFP puis ils ont été introduits dans le génome de poissons modèles (zebrafish ou médaka) par microinjection chez l’embryon au stade une cellule. Le génotypage des animaux transgéniques sera réalisé par PCR sur ADN génomique puis par southern blot. L’analyse de l’expression du transgène sera réalisée par une observation directe par microscopie à fluorescence, par PCR quantitative en temps réel sur différents tissus chez l’adulte, et par hybridation in toto chez l’embryon.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Extraction d’ADN génomique, PCR, PCR quantitative en temps réel, extraction d’ARN, réverse transcription, hybridation in toto, immunohistochimie, microscopie à fluorescence

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