print

> Stages de M2 > Liste des stages proposés pour l’année 2012-2013. > Recherche des partenaires de la protéine Spo11 murine

Recherche des partenaires de la protéine Spo11 murine

proposé par Bernard de Massy et Thomas Robert, CNRS, Montpellier (34)

Projet de stage : La recombinaison méiotique est une étape clef de la reproduction sexuée : la recombinaison entre chromosomes homologues assure la ségrégation correcte des chromosomes à la première division de méiose. L’absence de recombinaison conduit à la stérilité. La protéine Spo11 est essentielle à la méiose car elle catalyse les cassures double brin de l’ADN qui permettent l’initiation de la recombinaison homologue. Malgré son importance, le mode d’action de Spo11 reste mal compris. Cette protéine est l’orthologue eucaryote de la protéine TopoVIA d’archaebactérie dont l’activité nécessite la présence d’une deuxième sous-unité : TopoVIB. Une question essentielle qui reste à élucider est de déterminer si l’activité de Spo11 dépend d’une seconde sous-unité. Le projet proposé vise à identifier cette seconde sous-unité. Deux stratégies seront mises en place. La première consiste à purifier des complexes protéiques à partir de lignées HeLa stables exprimant la protéine Spo11. La seconde stratégie consiste à rechercher des partenaires via la technique de phage display. Il s’agira d’utiliser la partie de Spo11 qui couvre la zone d’interaction putative entre les deux sous-unités comme appât contre une banque de peptides de 7 acides aminés. Les protéines qui correspondent aux peptides interagissant seront ensuite analysées.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Culture cellulaire, fractionnement cellulaire (purification des noyaux, de la chromatine), biologie moléculaire (clonage, PCR), immunoprécipitation de protéines et purification de complexes protéiques, immunofluorescence (suivi in vivo des protéines) microbiologie (culture de phages).

Documents joints

- Site propulsé par Spip 1.9 -
-- Master de reproduction et développement - http://www.reprodev.fr --