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Relations entre Gas1 et GFRα1, deux GPI-APs, dans le contrôle de la fusion gamétique chez la souris

proposé par Brigitte LEFEVRE , Unité Génomique, Epigénétique et Physiologie de la Reproduction PARIS

Projet de stage :

La fusion des membranes gamétiques qui a lieu lors de la fécondation nécessite des complexes multimoléculaires d’adhésion ainsi que des mécanismes de transduction de signaux impliqués dans leur réalisation. Depuis le début des années 2000, on sait que les protéines ancrées à un glycosyl-phosphatidylinositol (GPI-APs) sont impliquées dans ces phénomènes. La ou les GPI-AP impliquée(s) ne sont pas encore identifiée(s) cependant nous venons au laboratoire, d’en identifier deux : Gas1 (Growth arrest specific 1) dont la délétion est le plus souvent létale, les rares femelles mutantes survivantes étant très hypofertiles et GFRα1 (GDNF Receptor α1) dont la délétion cause une létalité périnatale. Leur présence sur l’ovocyte ovulé de souris a été mise en évidence par immunofluorescence et Western blot. Leur implication dans la fusion gamétique a été démontrée par l’observation de réduction des index de fécondation après préincubation des ovocytes ovulés avec les anticorps contre ces protéines et/ou par la micro-injection de siRNA. Gas1est un co-récepteur pour les facteurs neurotrophiques dérivés des cellules gliales (GDNF) qui se lient à leur récepteur connu, GFRα1. La liaison des GDNF aux récepteurs GFRα mène à l’activation d’un récepteur transmembranaire tyrosine kinase (RET). Cependant, le rôle de Gas1 est étudié essentiellement dans les cellules nerveuses. Le projet consiste donc à mieux comprendre leurs rôles respectifs dans l’ovocyte ainsi que leurs interactions/rétrocontrôles via les voies de signalisation qu’elles pourraient induire.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Western blot, co-Immunoprécipitation, immunofluorescence, micromanipulations, spinning disk, mesure des forces d’adhésion gamétique (BFP°

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