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Réponse fonctionnelle des membranes fœtales aux ligands des Toll-Like Receptors (TLRs)

proposé par Michelle BREUILLER-FOUCHE et Céline MEHATS, Inserm Unité 767 « Grossesse normale et pathologique », Hôpital Saint Vincent de Paul, Bâtiment M. Lelong, Porte 5, RDC, 82 Avenue Denfert-Rochereau, 75014 Paris

Projet de stage : Nous avons entrepris depuis quelques années de caractériser la réponse inflammatoire des membranes fœtales et mis en place des modèles d’étude : explants de membranes fœtales et cultures primaires de cellules chorioniques. Jusqu’ici, le modèle d’inflammation privilégié fut une inflammation induite par le LPS d’E. coli, ce qui limite le champ d’étude aux bactéries à Gram négatif, n’activant que le TLR4. Cependant il a été montré que le prématuré est colonisé de façon précoce avec essentiellement des bactéries à Gram positif, avec un délai d’implantation des bactéries à Gram négatif. Nous proposons donc par le présent projet d’étendre l’étude par la caractérisation de la réponse à l’ensemble des ligands naturels ou synthétiques des TLRs, disponibles commercialement.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Des explants de membranes fœtales accolées ou séparées et des cellules chorioniques (obtenus à partir de placentas prélevés à terme lors de césarienne systématique) seront incubés en présence de ligands naturels ou synthétiques des TLRs et la cinétique de sécrétion de cytokines et médiateurs de la rupture des membranes sera évaluée dans les milieux de culture (mesures d’IL-6 par ELISA et de MMP-9 par zymographie). L’éventuelle entrée en apoptose sera recherchée par la présence de la caspase 3 clivée et la balance BAX/ BCL-2 par western-blot. L’expression des récepteurs TLR1 à 9 sera mesurée par PCR quantitative et recherchée par western blot et immuno-cytochimie à l’aide d’anticorps spécifiques quand ils existent.

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